LCM结合定量蛋白质组学技术筛选胃癌组织差异表达蛋白质

论文摘要

目的:胃癌是一种多基因参与多阶段侵袭性疾病,胃癌的治疗早期诊断是关键,因此,胃癌早期发现尤显重要,本研究拟通过比较分析胃癌与正常胃粘膜组织间差异表达蛋白质谱,筛选与鉴定出具有重要意义的差异表达蛋白质分子,为寻找胃癌早期诊断及治疗的分子标志物提供初步的实验依据。方法:本研究应用激光捕获显微切割（laser capture microdissection, LCM）技术,获取高纯度的胃癌组织与正常胃粘膜的腺体组织,通过同位素iTRAQ标记胃癌与正常胃粘膜组织总蛋白,然后用强阳离子交换/反相液相色谱（SCX/nanoHPLC）进行电喷雾串联质谱分析（ESI-MS/MS）,获得两组样本的多肽及相对丰度信息,通过数据库搜索与比对,鉴定差异表达蛋白质。结果:本研究通过定量蛋白组学的方法,比较胃低分化腺癌癌性腺体及正常胃黏膜腺体细胞间蛋白质差异,共鉴定出319个蛋白质,其中表达差异在2倍以上的88个,在胃癌中呈高表达的12个、呈低表达的76个。按蛋白质功能分为七大类:细胞骨架蛋白、分子伴侣、信号传导、生物代谢、凋亡,蛋白质合成与代谢类及其他蛋白质。12种高表达的蛋白质分别是细胞骨架蛋白和分泌蛋白比如vimentin、CK18、Decorin、Lumican等,低表达的76种蛋白质中,有与信号传导相关蛋白如Septin9、Ras-related protein Rab-44、S100P等,有与生物氧化相关蛋白如Peroxiredoxins-1、Cytochrome c oxidase subunit 5B等,有与蛋白合成相关蛋白如60S ribosomal protein L8、Histone H1x等,有细胞骨架蛋白如CK19、Cofilin-1等,有与调亡相关蛋白如Microtubule-associated protein 1S、Protein-glutamine gamma glutamyltransferase 2等,有与分子伴侣相关蛋白如HSP60、HSP70、HSP90β。胃癌组织中上述蛋白质的表达改变,可能参与了胃癌的发生和发展。结论:1.联合LCM与iTRAQ定量蛋白质组学技术成功筛选了胃腺癌差异表达蛋白质,共鉴定319个蛋白,12个蛋白在胃腺癌中高表达,76个蛋白在胃腺癌中低表达。2.鉴定的差异表达蛋白质Ezrin、Septin9、Prdx1、Prdx 6等为胃腺癌肿瘤标志物的发现和分子机制的探讨提供了有价值的信息。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 技术路线
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录一
• 附录二
• 致谢