论文摘要
目的通过实验探索肝细胞的分离，冻存的适当方法，以期进一步提高肝细胞的活率和活性。方法用体重20-30克左右的昆明小鼠为肝细胞供体，用改良的胶原酶灌注法分离肝细胞，将分离好的肝细胞分别以不同的冻存液进行逐级降温缓慢冻存，置液氮中。于半个月，一个月，一个半月，两个月快速复苏肝细胞，观测肝细胞的活率，功能和形态学。结果1通过改良的胶原酶灌注方法，每只老鼠可获得大量的肝细胞，肝细胞的活率达到90％以上。2冻存肝细胞于半月，一月，一个半月，两月复苏检测实验组的肝细胞的活率TB和PI染色都在80％左右，而对照组肝细胞的活率TB和PI染色在50％左右，两组之间具有统计学意义（P＜0.05）；ALT漏出率的值实验组在13.5左右，而对照组在24.0左右，两组之间具有统计学意义（P＜0.05）；AST漏出率的值实验组在15.0左右，而对照组在25.0左右，两组之间具有统计学意义（P＜0.05）：LDH漏出率的值实验组在15.0左右，而对照组在26.0左右，两组之间具有统计学意义（P＜0.05）：合成白蛋白的值实验组在3.4左右，而对照组在2.6左右，两组之间均有统计学意义（P＜0.05）。3各个复苏时段实验组和对照组的的活率，肝细胞ALT，AST，LDH的漏出率和合成白蛋白的能力之间无差别（P＞0.05）。结论1实验冻存液较常规冻存液在本研究中冻存数月能有效的减轻肝细胞的损伤，发挥良好的保护作用。2肝细胞在适当的冻存保护液下，置液氮中短期保存不影响肝细胞的活性。