论文摘要
目的:构建一种新的抗肿瘤血管生成DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-1（n1-4）。 方法:采用RT-PCR技术,从BALB/c胎鼠组织中扩增出编码416个氨基酸残基的鼠血管内皮生长因子受体flk-1胞外区1-4个袢的cDNA片段,经DNA序列分析后,将flk-1（n1-4）的cDNA片段插入含CMV启动子的真核表达载体质粒pcDNA3.1+中,从而构建成重组质粒pcDNA3.1+/flk-1（n1-4）。并经脂质体法将重组质粒pcDNA3.1+/flk-1（n1-4）转染真核表达系统COS-7细胞,通过Western blot实验检测重组质粒pcDNA3.1+/flk-1（n1-4）在真核表达系统COS-7细胞中蛋白的表达。 结果:RT-PCR扩增产物为1248bp大小的基因片段,经过DNA序列分析证明与Gene Bank所公布的flk-1胞外区1-4结构域碱基一致;成功构建了重组质粒pcDNA3.1+/flk-1（n1-4）;并且该重组质粒在真核表达系统COS-7细胞中成功得到表达。 结论:成功地制备了抗肿瘤血管生成DNA疫苗pcDNA3.1+flk-1（n1-4）,为进一步开展有关抗肿瘤血管生成的动物实验和临床应用奠定了基础。
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