家蚕蛹油降解细菌的分离、鉴定及降解能力测定

论文摘要

利用平板稀释培养法对缫丝废水处理池中的细菌进行了分离,通过紫外分光光度法对其降解家蚕蛹油的能力进行了测定。采用细菌基因组重复序列PCR技术（rep-PCR）,对家蚕蛹油降解细菌进行了聚类分析。采用菌落形态、生理生化特征和16S rDNA序列同源性分析对家蚕蛹油降解细菌进行了鉴定。选用Shannom-Wiener指数（H’）、丰富度指数（S）、Pielou均匀度指数（J）和Simpson优势度指数（D）,对家蚕蛹油降解细菌的生物多样性进行了分析。主要结果如下。从缫丝废水处理池中共分离得到57个对家蚕蛹油具有降解能力的细菌分离物。降解能力超过50%的细菌分离物有12个,其中H73、H23、H1、H5和H43在72h内对家蚕蛹油的降解率分别达到76.36%、62.04%、60.58%、53.85%和51.20%。家蚕蛹油降解细菌rep-PCR基因指纹分析图显示,57个家蚕蛹油降解细菌被分为44个聚类群。细菌鉴定结果表明,44个聚类群中的39个聚类群属于芽孢杆菌属（Bacillus sp.）,1个聚类群为微杆菌属（Microbacterium sp.）,2个聚类群为肠杆菌属（Enterobacter sp.）,另外2个聚类群尚未获得其16S rDNA序列,有待进一步鉴定。各菌株的16S rDNA序列已在GenBank上注册。其中,芽孢杆菌属的细菌数量为1.4473×106CFU/mL,大大高于肠杆菌属和微杆菌属的细菌数量,为家蚕蛹油降解细菌中的优势菌群。多样性分析结果表明,芽孢杆菌属的多样性指数、丰富度指数、均匀度指数和优势度指数都高于其他两个属的细菌。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 制丝废水污染及处理现状概述
• 1.2 制丝废水处理方法
• 1.2.1 物理法
• 1.2.1.1 沉淀法
• 1.2.1.2 过滤法
• 1.2.1.3 气浮法
• 1.2.2 化学法
• 1.2.2.1 化学混凝法
• 1.2.2.2 中和法
• 1.2.3 物理化学法
• 1.2.3.1 吸附法
• 1.2.3.2 膜分离法
• 1.2.4 生物法
• 1.2.4.1 生物膜法
• 1.2.4.2 活性污泥法
• 1.2.4.3 氧化塘法
• 1.2.4.4 厌氧生物处理
• 1.3 油脂废水微生物降解的研究进展
• 1.3.1 油脂废水的危害
• 1.3.2 微生物降解途径的主要类型
• 1.3.3 微生物降解油脂的机理
• 1.3.4 降解油脂的微生物
• 1.3.5 生物修复在油脂降解中的应用
• 1.4 本研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 样品采集
• 2.1.2 细菌分离及筛选培养基
• 2.1.3 主要软件
• 2.1.4 主要药品试剂
• 2.1.5 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 细菌的分离与计数
• 2.2.2 家蚕蛹油含量测定的标准曲线制作
• 2.2.3 细菌对家蚕蛹油的降解能力测定
• 2.2.4 家蚕蛹油降解细菌rep-PCR 基因指纹分析
• 2.2.5 细菌菌体形态观察及生理生化指标测定
• 2.2.5.1 菌体及菌落形态观察
• 2.2.5.2 运动性观察
• 2.2.5.3 芽孢观察
• 2.2.5.4 淀粉水解试验
• 2.2.5.5 明胶液化试验
• 2.2.5.6 柠檬酸盐利用试验
• 2.2.5.7 接触酶试验
• 2.2.5.8 糖醇类发酵试验
• 2.2.5.9 硝酸盐还原试验
• 2.2.5.10 V-P 测定
• 2.2.5.11 吲哚生成试验
• 2.2.5.12 酪氨酸水解
• 2.2.5.13 耐盐性试验
• 2.2.5.14 耐热性测定
• 2.2.5.16 甲基红试验（M.R）
• 2.2.5.17 苯丙氨酸脱氨酶试验
• 2.2.6 家蚕蛹油降解细菌16SrDNA 序列同源性分析
• 2.2.6.1 基因组DNA 的提取
• 2.2.6.2 16S rDNA 片断的扩增
• 2.2.6.3 克隆与筛选
• 2.2.6.4 DNA 序列测定及分析
• 2.2.7 家蚕蛹油降解细菌的多样性分析
• 3 结果与分析
• 3.1 细菌的分离与计数
• 3.2 细菌对家蚕蛹油的降解能力
• 3.2.1 家蚕蛹油含量测定的标准曲线
• 3.2.2 细菌对家蚕蛹油的降解能力
• 3.3 家蚕蛹油降解细菌的指纹图谱分析
• 3.4 家蚕蛹油降解细菌的鉴定结果
• 3.4.1 家蚕蛹油降解细菌的形态特征和生理生化特性
• 3.4.2 家蚕蛹油降解细菌的16S rDNA 序列分析结果
• 3.4.2.1 家蚕蛹油降解细菌16S rDNA 片断的扩增
• 3.4.2.2 克隆与筛选
• 3.4.2.3 家蚕蛹油降解细菌DNA 序列测定及分析
• 3.4.3 家蚕蛹油降解细菌的多样性分析
• 4 讨论
• 4.1 油脂降解菌的筛选方法
• 4.2 细菌的分类与鉴定方法
• 4.3 油脂微生物降解的影响因素
• 4.4 降解细菌种群结构的研究
• 4.5 下一步的工作设想
• 5 结论
• 5.1 家蚕蛹油降解细菌的降解能力
• 5.2 家蚕蛹油降解细菌的 rep-PCR 基因指纹分析
• 5.3 家蚕蛹油降解细菌的鉴定
• 5.4 家蚕蛹油降解细菌的多样性分析
• 参考文献
• 附录一 部分细菌对家蚕蛹油的降解效果图
• 附录二 42个家蚕蛹油降解细菌的16S RDNA 序列
• 致谢
• 硕士期间发表论文