mRNA差异显示技术克隆胃癌肝转移相关基因

论文摘要

目的 对比、研究胃癌肝转移相关基因的差异表达,探讨胃癌肝转移相关基因差异,及作为标志物早期诊断预测胃癌肝转移的可能性。 方法 应用差异显示聚合酶链反应（DD-PCR）技术,提取伴肝转移胃癌原发灶（2例）与其配对普通胃癌组织（2例）,及其各自的正常粘膜组织总RNA,将RT-PCR反应后的扩增产物在PAGE测序胶上电泳,经EB染色分离筛选差异表达的基因片段,进行PCR再扩增。将扩增的cDNA片段经克隆后进行测序,测序结果提交GenBank,经BLAST软件检索以进行同源性分析。RT-PCR检测一种人类逆转录病毒（HERV）基因在肝转移胃癌（9例）、无肝转移胃癌（9例）组织中的表达。 结果 在有肝转移胃癌、无肝转移胃癌组织中存在明显的基因表达差异,其中共检测出10个基因片段与已知人类基因片段具有不同程度的同源性,其均在有肝转移胃癌中高表达,对其中两个感兴趣的基因片段进行克隆、测序,经序列分析和同源性比较,确认W1基因（265bp）与线粒体基因80%同源,W6基因（320bp）与人类逆转录病毒基因（HERV）同源达99%。通过RT-PCR,计算HERV基因在有肝转移胃癌组织标本（9例）的阳性率为88.9%,经Fisher检验,P<0.01,有统计学意义。 结论1、经差异显示得到的10条基因片段,其在胃癌组织中的异常表达可能与胃癌肝转移有关。2、所得基因片段都是因基因上调所造成的,而非基因下调,我们推测胃癌肝转移,是以胃癌癌基因的进一步发生突变,导致转移为主,与癌基因的异常表达关系密切,与抑癌基因的失活关系小。3、HERV基因在有肝转移胃癌组织中的表达高于无肝转移胃癌组织中的表达,提示该基因可作为肿瘤标志物用于胃癌肝转移的早期诊断与预测。

论文目录

• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 1 RNA的浓度和纯度
• 2 cDNA鉴定结果
• 3 mRNA差异显示结果
• 4 限制性内切酶酶切位点检测及PCR产物酶切鉴定
• 5 克隆片段的序列分析及同源性比较
• 6 临床标本检测结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 学位论文知识产权