CXCR4在骨髓微环境介导的AML细胞耐药中的作用

CXCR4在骨髓微环境介导的AML细胞耐药中的作用

论文摘要

目的:该研究将AML细胞与骨髓间充质细胞MSC共培养,建立共培养体系;并观察MSC与AML细胞共培养对AML细胞凋亡和CXCR4表达的影响;并通过CXCR4拮抗剂沉默CXCR4的表达后,观察其对共培养体系中药物诱导AML细胞凋亡的影响,从而探索CXCR4在骨髓微环境介导的AML细胞耐药中的作用。方法:1.AML细胞与骨髓MSC共培养,建立共培养体系。2.分别应用Annexin V/PI双标记流式细胞技术和DAPI细胞核染色法比较MSC与AML细胞共培养对AML细胞自发凋亡和药物诱导细胞凋亡的影响。3.分别应用Real-time PCR,western blot和流式细胞技术检测MSC与AML细胞共培养对AML细胞CXCR4表达的影响。4.流式细胞技术检测CXCR4拮抗剂AMD3100对共培养体系中AML细胞表面CXCR4表达的影响。5.应用Annexin V/PI双标记的流式细胞技术检测CXCR4拮抗剂AMD3100对共培养体系中药物诱导AML细胞凋亡的影响。结果:1.AML细胞与MSC共培养后,显微镜下观察AML细胞逐渐粘附于MSC表面。2.Annexin V/PI双标记的流式细胞技术检测和DAPI细胞核染色均显示:AML细胞与MSC共培养后较AML细胞单独培养时,米托蒽醌诱导的AML细胞凋亡以及自发凋亡均减低(p均<0.05)。3.Real-time PCR 和 Western blot 显示:AML 细胞系 U937 细胞与 MSC 共培养(0h,24h,48h)后,AML细胞CXCR4mRNA和CXCR4蛋白表达均上调,并呈时间依赖性(P均<0.05);流式细胞技术检测显示:AML细胞表面CXCR4呈高表达状态,CXCR4阳性细胞约占94.3±0.7%;AML细胞与MSC共培养(Oh,24h,48h)后,PE-CXCR4平均荧光强度逐渐增强,并呈时间依赖性(p<0.05)。4.流式细胞技术检测显示:CXCR4拮抗剂AMD3100能抑制共培养体系中AML细胞表面CXCR4的表达,即CXCR4阳性AML细胞所占比例逐渐减少并呈剂量依赖性(97.0±1.0%逐渐降至9.6±0.8%,p均<0.05)。5.MSC与U937细胞共培养体系中,CXCR4拮抗剂AMD3100能增加米托蒽醌诱导 U937 细胞凋亡(13.4±2.4%vs20.6±2.3%,p<0.05)。结论:MSC与AML细胞共培养后,MSC能保护AML细胞,使其自发凋亡和药物诱导细胞凋亡减低;同时MSC与AML细胞共培养后,AML细胞CXCR4表达上调。而CXCR4拮抗剂AMD3100不仅能有效沉默共培养体系中AML细胞表面CXCR4的表达,同时能逆转MSC对AML细胞的保护作用,增加共培养体系中米托蒽醌诱导的AML细胞凋亡,从而克服这种骨髓微环境介导的AML细胞耐药。因此,CXCR4在骨髓微环境介导细胞耐药中发挥重要作用,AMD3100联合常规化疗可能成为复发/难治AML新的治疗策略。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 缩略语/符号说明
  • 前言
  • 研究现状、成果
  • 研究目的、方法
  • 对象和方法
  • 1.1 材料、试剂与仪器
  • 1.2 实验方法
  • 1.3 统计学分析
  • 结果
  • 2.1 MSC与AML细胞共培养,建立共培养体系
  • 2.2 MSC与AML细胞共培养对AML细胞凋亡的影响
  • 2.3 MSC与AML细胞共培养对AML细胞CXCR4表达的影响
  • 2.4 CXCR4拮抗剂AMD3100对AML细胞表面CXCR4表达影响
  • 2.5 CXCR4拮抗剂AMD3100对共培养体系中米托蒽醌药物诱导AML细胞凋亡的影响
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 发表论文和参加科研情况说明
  • 综述 骨髓微环境介导急性髓细胞白血病耐药机制的研究进展
  • 综述参考文献
  • 致谢
  • 相关论文文献

    标签:;  ;  ;  

    CXCR4在骨髓微环境介导的AML细胞耐药中的作用
    下载Doc文档

    猜你喜欢