前列腺素E2对T淋巴细胞的免疫调节作用以及对异基因造血干细胞移植小鼠急性移植物抗宿主病的影响

论文摘要

【目的】研究不同浓度前列腺素E2（PGE2）对外周血T细胞增殖的影响,分析其对不同T细胞亚群特征性细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）产生的影响以及对Th1和Th2细胞的免疫调节作用。探讨PGE2对异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）小鼠急性移植物抗宿主病（aGVHD）的影响。【方法】不同浓度PGE2条件下,应用抗CD3和抗CD28单克隆抗体（mAb）与健康成人外周血单个核细胞（MNC）,RPMI 1640,10%胎牛血清（FBS）,于37℃、5%CO2饱和湿度下共同培养120h,加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）,收集细胞测定细胞增殖程度,不加PGE2组为阳性对照组。PGE2浓度为14μmol/L条件下,应用抗CD3和抗CD28mAb刺激健康成人外周血MNC,分别于24h、48h、72h和120h取细胞上清液,ELISA测定上清液中IFN-γ和IL-4浓度,不加PGE2组为对照组。PGE2浓度为14μmol/L条件下,健康成人外周血MNC,培养20小时后加入佛波酯（PMA）50ng/ml、离子霉素1μg/ml和莫能霉素2μg/ml,培养4～6h后,测定CD4+T细胞和CD8+T细胞IL-4/IFN-γ生成情况,不加PGE2组为对照组。雌性BALB/c（H-2d）小鼠接受致死量全身照射（TBI）后,经小鼠尾静脉注射C57BL/6（H-2b）雄性供鼠骨髓细胞和脾脏细胞。B实验组分别于0d,4d,8d,12d尾静脉注射PGE2,A实验组未用药,观察两组小鼠造血恢复情况、aGVHD表现及生存时间,取皮肤、肝脏及小肠病理组织学检查。【结果】外周血T淋巴细胞在抗CD3mAb和抗CD28mAb的刺激下增殖,加入PGE2的浓度分别为7μmol/L、14μmol/L和28μmol/L时,T细胞增殖的抑制率分别为（18.3429±15.8648）%、（54.3114±19.1912）%和（91.2057±4.5962）%,随着PGE2的浓度增加,T细胞增殖的抑制率明显增加（P=0.001）;T细胞增殖抑制率与PEGE2浓度之间呈明显的正相关（相关系数=0.889,P=0.000）。对照组细胞培养上清液中的IFN-γ浓度随培养时间延长持续增高（P=0.046）,但实验组在培养120h的IFN-γ浓度与第72h的IFN-γ浓度相比较差异无统计学意义（P=0.917）;实验组和对照组细胞培养24h上清液的IFN-γ浓度分别为（537.63±440.65）pg/ml和（5215.47±6073.39）pg/ml（P=0.016）,培养48h上清液IFN-γ浓度分别为（6244.33±5578.32）pg/ml和（43046.00±31216.73）pg/ml（P=0.010）,培养72h细胞上清液IFN-γ浓度分别为（9592.87±7787.19）pg/ml和（69876.33±32381.93）pg/ml（P=0.004）,培养120h细胞上清液IFN-γ浓度分别为（10456.66±12077.94）pg/ml和（88934.33±36166.85）pg/ml（P=0.004）,实验组在不同时间产生的IFN-γ浓度均明显低于对照组。实验组在不同时间产生IL-4浓度无明显变化,24h、48h、72h和120h浓度分别为（21.80±6.84）pg/ml、（16.51±8.15）pg/ml、（11.85±9.99）pg/ml和（15.88±13.24）pg/ml（P=0.400）;对照组24h、48h、72h和120h细胞培养上清IL-4浓度分别为（144.14±119.85）pg/ml、（36.83±21.30）pg/ml、（21.17±16.51）pg/ml和（14.82±12.89）pg/ml,对照组24h细胞培养上清IL-4浓度高于48h、72h和120h（P值分别为0.007、0.003和0.002）;实验组与对照组在同一时间对比显示细胞培养24h时实验组IL-4浓度明显低于对照组,差异具有统计学意义（P=0.037）;培养48h、72h和120h,实验组与对照组IL-4浓度比较无统计学意义（P值分别为0.068、0.343和0.870）。实验组与对照组CD4+IFN-γ+T细胞的比例分别为23.81（16.16～48.73）%和24.04（12.03～50.77）%,差异无统计学意义（P=0.767）;实验组与对照组CD4+IL-4+的T细胞比例分别为3.98（1.61～38.19）%和2.74（1.82～9.72）%,实验组略高于对照组,但差异无统计学意义（P=0.051）;实验组与对照组CD4+IL-4+T细胞与CD4+IFN-γ+T细胞的比值分别为0.21094（0.069～0.784）和0.13239（0.045～0.511）,实验组的比值明显高于对照组,差异具有统计学意义（P=0.011）。实验组与对照组CD8+IFN-γ+T细胞的比例分别为44.48（22.52～60.68）%和39.02（20.63～62.93）%,差异无统计学意义（P=0.441）;实验组与对照组CD8+IL-4+T细胞的比例分别为19.04（4.21～50.69）%和9.46（0.48～48.02）%,实验组明显高于对照组,差异有统计学意义（P=0.015）;实验组与对照组CD8+IL-4+T细胞与CD8+IFN-γ+T细胞的比值分别为0.42806（0.159～0.949）和0.27775（0.017～0.918）,实验组比值明显高于对照组,差异具有统计学意义（P=0.038）。动物实验结果显示,A实验组小鼠体重开始下降的中位时间为移植后15（13～18）d,B实验组小鼠体重开始下降中位时间为移植后17.5（14～19）d,与A实验组相比较发生时间延迟,但区别无统计学意义（P=0.096）。A实验组和B实验组小鼠死亡前或50d处死前的aGVHD临床表现评分分别为（6.80±2.17）和（5.00±2.97）,区别无统计学意义（P=0.247）。生存情况比较显示两组小鼠之间50d的生存率区别无统计学意义（P=0.398）。【结论】PGE2在体外抑制外周血T细胞的增殖,随着PGE2浓度增加其对T细胞增殖的抑制率逐渐增强;PGE2影响T细胞产生Th1型和Th2型细胞因子,作用24h即可抑制IFN-γ的产生,并且显著影响T细胞IFN-γ的产生高峰出现,对IFN-γ具有持续性的抑制作用;PGE2对T细胞产生IL-4的影响在24h出现,但是对IL-4的持续性影响并不明显;PGE2使CD4+IL-4+T细胞与CD4+IFN-γ+T细胞的比值和CD8+IL-4+T细胞与CD8+IFN-γ+T细胞的比值增加,调节T细胞的免疫反应向Th2方向发展。PGE2有推迟allo-HSCT小鼠aGVHD发生时间的趋势,但aGVHD的临床表现严重程度和移植后的生存率没有得到改善。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 附录