论文摘要
目前,口腔颌面部急慢性疼痛的机制不明,而神经系统致敏的问题正是神经科学领域研究的难点和热点。在疼痛研究中,各种牙髓损伤动物模型具有很多优点,而急性牙髓炎是较为理性的病理性疼痛动物模型,对于研究牙髓和口颌面疼痛的机制具有重要价值。目的:本研究结合临床实际,采用开髓封LPS的方法,建立大鼠急性牙髓炎的病理性疼痛动物模型;研究不同牙髓炎症阶段脑干中相关核团c-fos和GFAP的变化时程,探讨中枢致敏机制;进而应用蛋白质组学新技术,筛选与鉴定急性牙髓炎致敏时三叉神经节异常表达蛋白,寻找痛觉相关蛋白。材料与方法:雄性SD大鼠,设正常对照组和实验组。实验组动物左上第一磨牙开髓,封LPS,于6小时、12小时、24小时、48小时取牙齿、三叉神经节和脑干组织,用HE染色方法观察牙髓炎症的发展变化,用免疫组化、western-blot的方法分析脑干三叉神经脊束核尾侧亚核（Vc）、三叉神经脊束核极间亚核（ⅵ）、三叉神经孤束核（NTS）核团内c-fos和GFAP的变化时程,用蛋白质组学方法分析三叉神经节功能表达差异蛋白。结果:1.HE染色结果:随着LPS封药时间的延长,穿髓点下方的炎症范围逐渐扩展,程度加重。12-24小时出现典型的急性牙髓炎的病理学变化,穿髓点下方大量中性粒细胞浸润伴有局限性小脓肿形成,牙髓组织充血、水肿渗出明显,成牙本质细胞排列紊乱,部分牙髓变性坏死。48小时部分动物病变扩展至根尖周组织。2.脑干c-fos蛋白变化时程:在LPS致急性牙髓致敏后,与对照组相比,实验组Vc核c-fos阳性神经元表达数目明显增加,并呈时间依赖性,24小时达到最高;对侧Vc核及Vi核的c-fos表达数目少于实验侧,但变化趋势与实验侧相近;NTS的c-fos阳性神经元数目显著增加,6h最高,随时间逐渐降低,48小时仍高于对照组。3.急性牙髓炎脑干中星形胶质细胞GFAP的变化时程:在LPS致急性牙髓炎致敏后,Vc变化时程慢于c-fos阳性神经元,24 h至48h数量增多,此时星形胶质细胞胞体变大,突起增粗,染色加深,与c-fos阳性神经元分布区域相近。对侧Vc未见显著变化。而三叉神经节的卫星胶质细胞48小时才出现较弱的阳性表达。4.蛋白质组分析鉴定出48个差异点蛋白质斑点,其中21个表达量上调,27个下调,经质谱检测出10个点,分别为甲状腺素运载蛋白;内质网蛋白ERp29;低分子量神经丝蛋白;盘膜边缘蛋白;血清白蛋白前体;外周髓磷脂P0蛋白;组织蛋白酶B;丙酮酸脱氢酶E1;复制蛋白A和细胞骨架肌动蛋白。结论:1.开髓封LPS可以有效的造成急性牙髓炎动物模型,是较好的痛觉致敏模型;2.在急性牙髓炎致敏过程中,随着炎症的进展,脑干相关核团的神经元和胶质细胞先后被激活,相互作用,共同造成神经系统的致敏;3.在鉴定的10种蛋白质中,包括了细胞结构蛋白、分子伴侣蛋白、生物合成相关蛋白、以及在应激反应和能量代谢等重要生命活动中起关键作用的酶,细胞骨架破坏、能量代谢改变、信号转导异常等共同参与了LPS急性牙髓致敏的形成;4.内质网蛋白ER29、神经丝蛋白及髓磷脂P0蛋白可能成为评价牙髓急性痛敏时程、疼痛程度及预测预后的生物指标,为进一步深入研究急性牙髓炎性致敏的分子机制提供重要的线索,对研究三叉神经节功能及口颌面部疼痛的诊断和治疗具有参考价值。
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