论文摘要
背景和目的先天性巨结肠（Hirschsprung’s disease，HD）又称先天性肠神经节细胞缺乏症，是一种以肠道末端神经节细胞完全缺如为特征的消化道常见畸形。其病因和发病机制尚未完全阐明，目前认为，HD发病是多个基因或易感位点共同作用或相互交叉影响的结果，其中RET/GDNF和EDN-3/EDNRB/ECE-1这两个信号通路的研究最为广泛，受体酪氨酸激酶基因（receptor tyrosine kinase，RET）信号通路障碍主要引起家族性巨结肠，内皮素3（endothelin-3,EDN-3）或内皮素B受体（endothelin-B receptor，EDNRB）基因的变异主要出现在散发性HD患儿中。近年来，国内外对EDN-3基因的突变研究较多，但对其在HD患者结肠中表达情况如何研究较少。钙视网膜蛋白（calretinin,CR）是一种重要的钙结合蛋白，CR参与神经细胞胞内钙离子(Ca2+)的调节，而Ca2+是细胞内重要的第二信使，对神经细胞的代谢和功能产生广泛的影响。EDN-3/EDNRB信号传导通道及神经型一氧化氮合酶基因（nNOS）、C-fos基因均是通过调节细胞内Ca2+浓度参与HD的发病。本研究收集散发性HD患儿结肠标本，检测其肠壁中CR基因和EDN-3基因mRNA的表达情况，探讨CR基因是否参与散发性HD的发生及其与EDN-3基因的关系。材料和方法（1）收集18例散发性HD患儿手术切除结肠标本痉挛段和扩张段，RT-PCR技术观察各段结肠肠壁中EDN-3基因和CR基因表达情况，比较痉挛段和扩张段EDN-3基因及CR基因mRNA平均相对量的变化。（2）收集18例非HD患儿结肠标本作为对照组，检测其结肠壁中EDN-3基因和CR基因mRNA情况，比较非HD和HD患儿中EDN-3和CR基因mRNA平均相对量的变化。（3）免疫组化法检测散发性HD患儿痉挛段和扩张段中CR蛋白表达情况，比较两组中CR蛋白表达的变化。结果（1）与对照组相比，在散发性HD患儿结肠壁中，无论是有神经节细胞的扩张段还是无神经节细胞的痉挛段，EDN-3基因mRNA相对量都明显减少（p＜0.01）。在HD痉挛段和扩张段EDN-3基因mRNA相对量差异无统计学意义（p＞0.05）。（2）与对照组相比，HD扩张段、HD痉挛段CR基因mRNA相对量逐渐减少，任意两组间比较差异均有统计学意义（p＜0.01）。（3）散发性HD患儿痉挛段和扩张段CR蛋白表达情况不一，痉挛段CR蛋白近乎缺失。而在扩张段呈强阳性表达，与痉挛段相比差异有统计学意义（p＜0.01）。（4）与对照组相比，HD扩张段、HD痉挛段EDN-3基因和CR基因mRNA相对量均逐渐减少，进行统计学二元变量线性相关性分析，结果二者呈正相关（γ=0.999，p=0.023＜0.05）。结论（1）EDN-3基因是散发性HD的重要易感基因，其mRNA表达水平的改变比其突变更频繁；EDN-3基因mRNA表达水平下调参与了散发性HD的发生。（2）与正常对照组相比，CR基因mRNA表达水平在HD扩张段、痉挛段逐渐减少，特别在痉挛段其表达近乎缺失，CR基因可能参与散发性HD的发生。（3）CR基因与EDN-3基因的表达呈正相关；对散发性HD的形成二者可能存在某种内在联系。（4）HD痉挛段肠壁中CR蛋白免疫组化阳性反应缺失，CR可以作为诊断HD的辅助指标。