左卡尼汀及其酰化物在中国健康志愿者体内的药代动力学研究

论文摘要

目的:建立专属、灵敏、简便的检测人血浆和尿液中左卡尼汀（L-carnitine,LC）及其酰化物乙酰左卡尼汀（Acetyl-L-cainitine,ALC）、丙酰左卡尼汀（Propionyl-L-cainitine,PLC）含量的高效液相色谱方法,并应用于中国健康人左卡尼汀口服液单次给药后左卡尼汀及其酰化物的人体药代动力学研究。方法:HPLC-UV法:血浆样本经蛋白沉淀处理后,用对-溴苯甲酰甲基溴化物（PBPB）将样本紫外衍生化,高效液相色谱法测定,采用Hypersil SiO2色谱柱（4.6×250mm;5μm）,流动相为乙腈:柠檬酸缓冲液（10:90）,流速1.2ml·min-1,检测波长260nm。HPLC-FL法:血浆样本经蛋白沉淀处理后,用1-氨基蒽（1-AA）将样本荧光衍生化,高效液相色谱方法测定,色谱柱采用Hypersil C18柱（4.6mm×200mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1mol·L-1乙酸铵（34:66）,流速为1.0ml·min-1,检测波长:Ex248nm,Em418nm。绘制标准曲线,测定精密度、回收率和稳定性,检测正常人血浆及尿液的左卡尼汀及其酰化物的含量。12名健康受试者左卡尼汀口服液单次给药2g后,分别于服药前（0h）和服药后0.5h,1.0h,1.5h,2h,2.5h,3.0h,3.5h,4.0h,5.0h,6.0h,8.0h,12.0h,24.0h,取前臂静脉血4ml,置肝素试管中,3000r·min-1离心,分离血浆,同时收集给药后0h,0～2h,2～4h,4～8h,8～12h,12～24 h的尿液,-20℃冷冻待测。采用荧光衍生化高效液相色谱法测定血浆和尿中LC,ALC,PLC的含量。采用DAS软件进行处理,计算药代动力学参数。结果:紫外高效液相色谱法的血浆LC线性范围为2.5～500μmol·L-1,尿液LC的线性范围为2～1000μmol·L-1,回收率、精密度及稳定性试验均符合血、尿检测方法学的要求。荧光高效液相色谱法的血浆和尿液LC、ALC和PLC样品的线性范围分别是2.5～500,0.5～50,0.1～20μmol·L-1和2～1000,1～500,0.2～50μmol·L-1。回收率、精密度及稳定性试验均符合血、尿检测方法学的要求。采用荧光高效液相色谱法对12名中国健康受试者左卡尼汀口服液单次给药2g后左卡尼汀及酰化物进行药代动力学研究,主要药代动力学参数LC:Cmax:（84.73±25.23）μmol·L-1,t1/2α:（1.66±1.20）h,t1/2β:（60.33±14.97）h,AUC（0-t）:（2676.41±708.33）μmol·L-1·h,AUC（0-∞）:（2676.41±708.33）μmol·L-1·h,Tmax:（3.4±0.46）h。ALC:t1/2α:（6.33±6.39）h,t1/2β（5.90±28.86）h,AUC（0-t）:（119.54±55.84）μmol·L-1·h,AUC（0-∞）:（166.20±77.41）μmol·L-1·h,Tmax:（4±0.66）h,Cmax:（12.89±5.52）μmol·L-1和PLC:t1/2α:（3.10±3.93）h,t1/2β:（25.74±30.33）h,AUC（0-t）:（57.98±48.52）μmol·L-1·h,AUC（0-∞）:（155.57±264.22）μmol·L-1·h,Tmax:（3.8±0.79）h,Cmax.（5.08±3.08）μmol·L-1。LC、ALC、PLC 24小时尿药累计排泄量分别为:（613.47±161.72）μmol,（368.25±134.77）μmol,（61.29±37.75）μmol,LC24小时累计排泄率为6.05%。结论:建立了同时检测血浆和尿液中左卡尼汀浓度的紫外衍生化高效液相色谱法和同时检测血浆和尿液中左卡尼汀及酰化物的荧光衍生化高效液相色谱法。采用荧光衍生化高效液相色谱法,首次测定了12名中国健康受试者左卡尼汀口服液单次给药2g后左卡尼汀及酰化物的药代动力学参数。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 仪器
• 1.2 试剂
• 1.3 HPLC-UV试验方法
• 1.3.1 色谱条件
• 1.3.2 贮备液和标准血样的制备
• 1.3.3 血浆及尿液样品处理
• 1.3.4 标准曲线的绘制
• 1.4 HPLC-FL试验方法
• 1.4.1 色谱条件
• 1.4.2 贮备液和标准血样的制备
• 1.4.3 血浆及尿液样品处理
• 1.4.4 LC，ALC和 PLC衍生化过程
• 1.4.5 标准曲线的绘制
• 1.5 药代动力学实验设计与方法
• 1.5.1 受试者
• 1.5.2 试验药物
• 1.5.3 试验方案设计
• 1.5.4 不良事件
• 1.6 数据分析与统计
• 第二章 结果
• 2.1 HPLC-UV
• 2.1.1 选择性试验
• 2.1.2 标准曲线
• 2.1.3 精密度试验
• 2.1.4 回收率试验
• 2.1.5 稳定性试验
• 2.1.6 临床血样测定
• 2.2 HPLC-FL
• 2.2.1 选择性试验
• 2.2.2 标准曲线
• 2.2.3 精密度试验
• 2.2.4 回收率试验
• 2.2.5 稳定性试验
• 2.2.6 临床血样测定
• 2.3 药代动力学试验结果
• 2.3.1 受试者体检试验结果
• 2.3.2 健康受试者血浆中LC、ALC及 PLC的浓度
• 2.3.3 血药浓度监测检测结果
• 2.3.5 性别之间各时间点血药浓度数据比较
• 2.3.6 药代动力学参数
• 2.3.7 LC、ALC、PLC的血药浓度相关性分析
• 2.3.8 尿药排出量及累积排出率
• 第三章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 附录
• 攻读硕士学位期间的研究成果
• 致谢