长白山区东北刺人参遗传多样性RAPD分析及组织培养的研究

论文摘要

运用RAPD分子标记技术对长白山区东北刺人参（Oplopanax elatus）的遗传多样性进行了研究,旨在探讨其致濒原因;同时以东北刺人参种子为材料进行组织培养研究,探明影响试管苗增殖和生根的诸因素,为开发利用东北刺人参提供理论依据。通过研究影响RAPD扩增的条件,找出适合东北刺人参RAPD扩增体系,实验结果表明:在20μL反应体系中,9.8μLddH2O,250.0 dNTP,2.0 mmol·L-1MgCl2,2.0μL Buffer,0.4μmol·L-1引物,10.0 ng DNA模板,1.5 U Taq DNA聚合酶,扩增反应程序为:94℃预变性5 min,94℃变性45s,36℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,40个循环;最后72℃延伸7 min,扩增效果较好。从120个随机引物中筛选出16条可扩增出明显DNA多态性条带的引物,用这些引物对7个地区的东北刺人参进行RAPD分析结果表明,16条引物共扩增出117条带,其中多态性条带为51条,多态性的频率为43.62%,多态性比率较低,说明东北刺人参的致濒可能与此有关。采用UPGMA系统聚类法,可将长白地区东北刺人参分为两大类:位于长白山老岭山脉的东北刺人参居群聚为一类,包括通化白鸡腰子,通化石湖,抚松漫江,临江八公里,白山大镜;位于长白山主峰南侧的东北刺人参居群聚为一类,包括长白十五道沟,长白十九道沟。对东北刺人参进行组织培养研究的结果,在增殖培养阶段采用去顶芽方式,培养基为WPM+BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+蔗糖30.0 g·L-1+琼脂7.0 g·L-1时,有利于试管苗的增殖及生长;在生根阶段,3/4WPM+NAA 0.1 mg·L-1+活性炭1.0 g·L-1+蔗糖30.0g·L-1+琼脂7.0 g·L-1,可促进东北刺人参生根及试管苗生长。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 一、东北刺人参简介及研究概况
• 二、濒危植物的遗传多样性研究
• 三、东北刺人参人工繁殖及存在问题
• 四、研究目的和意义
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 RAPD分析遗传多样性
• 1.2.1.1 基因组 DNA的提取
• 1.2.1.2 DNA扩增反应程序
• 1.2.1.3 PCR扩增体系优化
• 1.2.1.4 PCR产物检测
• 1.2.1.5 东北刺人参 RAPD反应的引物筛选
• 1.2.2 东北刺人参增殖培养条件
• 1.2.2.1 基本培养基种类的筛选
• 1.2.2.2 BA浓度对东北刺人参组培苗增殖生长的影响
• 1.2.2.3 BA和NAA不同浓度配比对东北刺人参组培苗增殖生长的影响
• 1.2.2.4 东北刺人参切掉顶芽对增殖生长的影响
• 1.2.3 生根条件
• 1.2.3.1 生长素 NAA对幼苗发根的影响
• 1.2.3.2 活性炭浓度对幼苗发根的影响
• 1.2.3.3 培养基浓度对对幼苗发根的影响
• 1.2.4 驯化和移栽
• 1.2.5 数据处理
• 2 结果与分析
• 2.1 RAPD分析遗传多样性
• 2.1.1 基因组 DNA的检测
• 2.1.2 东北刺人参 RAPD反应体系优化
• 2.1.3 RAPD扩增产物的多态性分析
• 2.1.4 东北刺人参居群间聚类分析
• 2.2 东北刺人参增殖培养
• 2.2.1 基本培养基种类对东北刺人参增殖生长的影响
• 2.2.2 培养基中 BA浓度对东北刺人参组培苗增殖生长的影响
• 2.2.3 BA与NAA的配比对东北刺人参组培苗增殖生长的影响
• 2.2.4 东北刺人参切掉顶芽对增殖生长的影响
• 2.3 东北刺人参生根培养
• 2.3.1 NAA对试管苗生根的影响
• 2.3.2 活性炭浓度对东北刺人参根生长的影响
• 2.3.3 培养基浓度对东北刺人参根生长的影响
• 2.4 驯化和移栽
• 3 讨论
• 3.1 基因组DNA提取及RAPD反应条件
• 3.2 东北刺人参遗传多样性分析
• 3.3 植物组织培养中影响试管苗增殖的因素
• 3.4 植物组织培养中影响试管苗生根的因素
• 4 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录