MTHFR、MTRR基因多态性与人自然流产的相关性研究

论文摘要

自然流产是妇产科临床常见病,病因复杂。引起自然流产的因素包括：遗传因素、免疫缺陷、感染因素、内分泌因素、解剖因素、社会因素等。自然流产的发病率占全部妊娠的10%-15%,近年临床发病率有上升趋势。由于自然流产的病因不明,影响临床的预防及治疗。随着分子生物学技术的发展,对于自然流产的遗传学方面的研究已成为近几年研究的热点,特别是对于叶酸-甲硫氨酸代谢循环过程中关键酶基因多态性的研究。其中亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductases, MTHFR）、甲硫氨酸合成酶还原酶（methyltransferasereductase,MTRR）等基因位点的多态性是学者们研究的热点。MTHFR在5,10-亚甲基四氢叶酸还原成为5-甲基四氢叶酸的过程中起催化作用。5-甲基四氢叶酸为同型半胱氨酸（homocysteine,HCY）提供一碳单位并使其甲基化而生成甲硫氨酸,从而起到调节体内HCY正常水平的作用；甲硫氨酸再活化为S-腺苷甲硫氨酸成为甲基供体,参与人体内的许多代谢反应。MTHFR基因位点突变对MTHFR酶的活性和热稳定性产生影响,从而影响叶酸、甲硫氨酸代谢。其中677 C→T突变、1298 A→C位点突变是常见的主要突变位点。此过程中重要的一个关键中间产物即甲硫氨酸,而甲硫氨酸是蛋白质合成及一碳单位代谢过程中的必须氨基酸。其合成过程是由甲硫氨酸合酶（methioninesynthetase,MTR）催化的,而MTR会因为辅助因子维生素B12被氧化最终导致其酶活性的丧失。丧失酶活性的MTR可在MTRR基因编码的相应酶作用下,通过还原型甲基化作用重新生成具有功能活性的MTR。MTRR是影响叶酸甲硫氨酸正常代谢的又一关键酶,编码此酶的基因位点突变也同样会影响到该酶的活性。而MTRR 66 A→G突变是目前最主要也是研究最多的突变位点。MTHFR C677T、A1298C,MTRR A66G三个基因位点多态性均会通过影响叶酸-甲硫氨酸代谢循环中的关键酶的活性,而影响叶酸和甲硫氨酸的正常代谢。然而叶酸和甲硫氨酸代谢的异常可能是自然流产发生的原因。叶酸、甲硫氨酸代谢异常可以一方面可以通过叶酸缺乏导致胎儿DNA、蛋白质合成减少,引起自然流产。另外,还可以通过高同型半胱氨酸血症引起血管内皮损伤、血管平滑肌细胞增生、机体的凝血和纤溶系统破坏、脂质代谢异常与HCY本身的胎盘毒性等机制导致自然流产的发生。目前国内外关于MTHFR、MTRR基因多态性与自然流产关系的研究主要集中在单个或者两个基因位点上。本文利用Taqman—MGB探针技术同时检测自然流产病人和正常早孕妇女体内MTHFR C677T、A1298C及MTRR A66G三个基因位点多态性,并分析其与自然流产之间的关系。目的探讨MTHFR C677T、A1298C及MTRR A66G基因位点多态性与自然流产的相关性。材料与方法收集同期60例自然流产患者和100例正常早孕妇女的口腔黏膜细胞后,利用柱式抽提法提取基因组DNA,采用Taqman—MGB技术分析其中MTHFRC677T、A1298C及MTRR A66G的基因多态性。用SPSS16.0软件对所取得的数据进行统计学分析及处理,各组MTHFR、MTRR基因型分布及等位基因频率之间的比较均采用χ2检验,计量资料的比较用均数±标准差（x±s）表示,两组计量资料用独立样本的t检验进行比较,均以α=0.05为检验水准。结果（1）自然流产组（28.57±4.80岁、10.72±1.21周）和对照组（28.41±4.32岁、10.68±1.16周）研究对象在年龄、孕周方面的差异无统计学意义。（2）自然流产组和正常对照组之间MTHFR C677T基因多态性比较：CC、CT、TT三种基因型在两组之中的分布具有统计学差异,纯合未突变基因型CC在自然流产组占3.33%低于对照组的23.00%,CT基因型在自然流产组所占比率56.67%也低于对照组的72.00%,而突变基因型TT在自然流产组多占频率明显增高（40.00%相对于5.00%）；纯合突变基因型TT在自然流产组中的表达频率明显增高,且相对于CC+CT基因型的相对危险度OR=12.667差异存在统计学意义；并且CT+TT基因型在自然流产组的分布频率96.67%也明显高于正常对照组的77.00%,差异存在显著性；另外,T等位基因在自然流产组占68.33%和在正常对照组所占比率41.00%,差异也有显著性。（3）自然流产组和正常对照组之间基因位点MTRR A66G的杂合型AG并突变型GG的分布差异具有显著性,且在自然流产组（41.67%）明显高于正常对照组（11.00%）；自然流产组中G等位基因的频率20.83%明显高于正常对照组6.00%,差异有统计学意义。（4） MTHFR A1298C基因在自然流产组和正常对照组之间杂合型和突变型（AC+CC）的分布频率18.33%、26.00%,且突变型C等位基因的频率9.17%、13.50%之间的差异性比较均无显著性。（5） MTHFR C677T与A1298C中的677 CT/1298 AC、677 CT/1298 CC、677TT/1298 AC、677 TT/1298 CC几种基因型协同作用比较时时,此几种基因型在自然流产组的分布频率35.00%明显高于正常对照组的19.00%,差异有显著性。结论（1） MTHFR C677T基因多态性可能是自然流产发生的危险因素。（2）MTRR A66G等位基因G突变与自然流产发生之间存在相关性。（3）未发现MTHFR A1298C单个基因位点突变与自然流产之间存在相关性,但其与C677T位点突变之间存在协同作用,可能增加自然流产的发生率。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 2 材料和方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果