VEGF模拟表位的筛选及其疫苗的构建

论文摘要

肿瘤的血管生成对于肿瘤的生长、浸润和转移有重要意义。肿瘤的生长可分为无血管期（avascular stage）和血管期（vascular stage）,体积超过1～2 mm3的肿瘤即进入血管期,需要新生血管维持营养供给和排泄代谢产物从而迅速生长并可发生转移。Folkman因而假设通过抑制血管生成便可抑制肿瘤的生长,这种设想得到了极好的验证,从此抗血管生成（antiangio genesis）治疗肿瘤的理论与实践开始确立、发展。近年来,抗血管生成研究的热点包括:VEGF及其受体抑制剂;阻断内皮细胞增殖的药物;基质金属蛋白酶抑制剂（MMPI）等。VEGF是目前发现的生物学活性最强,特异性最高的促血管生长因子,由肿瘤细胞、血管内皮细胞和巨噬细胞所合成,并通过自分泌/旁分泌方式特异地作用于血管内皮细胞上的受体,具有促进内皮细胞生长、增殖、迁移、细胞外基质降解、血管管型结构的形成等作用,对于肿瘤血管生成过具有重要作用,所以VEGF及VEGFR被认为是最有前途的抗肿瘤血管生成的靶点。Bevacizumab （Avastin）是第一个被FDA批准用于抗VEGF的单克隆抗体,临床试验表明对于结直肠癌、非小细胞肺癌等都具有良好的疗效。但单抗治疗的费用高、剂量大,需要反复注射及免疫原性反应极大的限制了单抗的临床应用。因此,构建针对VEGF的治疗性疫苗,刺激宿主免疫系统产生特异性体液免疫,从而中和VEGF,抑制肿瘤生长,这种方式克服了单抗的不足具有良好的发展前景。模拟表位疫苗是近年来随着噬菌体肽库技术发展起来的一类疫苗,它可以在构像上模拟天然抗原,诱导相应天然表位特异性的体液免疫反应,而且由于模拟表位分子小,可以直接以化学合成的方式得到,与传统疫苗以及基因工程产品相比,它造价低、工艺简单、质量容易控制、无致瘤性、无内毒素、无感染源等优点,因此是具有开发前景的一类疫苗。本课题利用噬菌体随机呈现肽库筛选技术筛选获得VEGF分子的模拟表位DHTLYTPYHTHP,经验证,这个肽可以模拟VEGF单克隆抗体Bevacizumab （Avastin）所识别的表位构象。以该表位为基础,使用匙孔蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin,KLH）为载体构建了针对VEGF的治疗性疫苗KLH-12P。该表位疫苗可以在小鼠体内诱导出抗血清,该抗血清可以与VEGF结合,并且对于血管内皮细胞的增长和迁移具有抑制作用。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一 VEGF模拟表位的筛选
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 模拟表位疫苗的构建及免疫
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验三 疫苗免疫效果鉴定
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢