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肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对鸡传染性法氏囊病毒的抑制作用

2020-12-08阅读(353)

肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对鸡传染性法氏囊病毒的抑制作用

论文摘要

为了寻求一种安全、高活性的抗病毒添加剂,本试验以肽聚葡甘露聚糖为材料,研究肽聚葡甘露聚糖硫酸酯的合成条件及其抗传染性法氏囊病毒的作用,共进行3个实验。试验一:利用氯磺酸-吡啶法合成肽聚葡甘露聚糖硫酸酯,通过正交试验确定最佳条件为:氯磺酸与吡啶体积比为1:2、反应温度为45℃、反应时间为3h。在该实验条件下得到的肽聚葡甘露聚糖硫酸酯的取代度为1.17。试验二:肽聚葡甘露聚糖硫酸酯体外抗病毒活性研究:用活细胞计数法测定肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对鸡胚成纤维细胞的毒性,在最大安全无毒浓度下测定感染前、感染时、感染后添加肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对鸡传染性法氏囊病毒的抑制效果。结果表明:SPGM对CEF的最大无毒安全浓度为200μg/mL,SPGM对CEF的CC50>3200μg/mL,SPGM对病毒的IC50为2.27μg/mL;不同给药方式下通过活细胞减少试验发现,SPGM能够与病毒结合,显著抑制IBDV的感染性;SPGM能够保护细胞,显著抑制IBDV对CEF的吸附作用;SPGM能够抑制吸附到细胞表面的IBDV对CEF穿透。试验三:选取400羽14日龄的体重接近的健康AA公雏,随机分为8组,每组50只。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为注射处理组,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组为饮水处理组,Ⅶ、Ⅷ分别为病毒对照组跟空白对照组。18日龄时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别肌肉注射0.5 mL浓度为2 mg/mL、4 mg/mL和8 mg/mL的SPGM,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组平均每只饮水12.5 mg、25mg和50mg SPGM,连续进行3d。21日龄时,除空白对照组其余各组接种100EID50IBDV,各组均实施ND疫苗免疫。攻毒后连续观察公雏的发病率及死亡率。在攻毒前1d和攻毒后1周检测淋巴细胞增殖活性以及iNOS活性,在攻毒前1d和攻毒后1周、2周和3周分别检测血清IL-2含量,NO含量和ND抗体效价。结果表明:（1）各处理组发病率及死亡率均低于IBDV攻毒组。（2）各处理组在攻毒前后淋巴细胞增殖活性均高于IBDV攻毒组,但都低于空白对照组（P<0.05）。（3）攻毒后1周各组IL-2都高于病毒对照组（P<0.05）,攻毒后2周各组IL-2都明显低于病毒对照组（P<0.05）;各处理组在攻毒后NO含量及iNOS活性都明显高于病毒对照组。相比病毒对照组各处理组在不同程度上能够加快病鸡的恢复。（4）各处理组在攻毒前都能够提高ND抗体效价,攻毒后高剂量处理组ND抗体效价显著高于病毒对照组（P<0.05）。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 绪论
  • 1.1 研究目的和研究意义
  • 1.2 国内外研究现状
  • 1.2.1 抗病毒药物、添加剂研究进展
  • 1.2.2 硫酸酯化多糖抗病毒研究进展
  • 1.2.3 啤酒酵母葡甘露聚糖结构及生物学活性
  • 1.3 技术路线
  • 第二章 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯的制备
  • 2.1 试验材料
  • 2.1.1 原料与试剂
  • 2.1.2 主要仪器
  • 2.2 试验方法
  • 2.2.1 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯的制备
  • 2.2.2 硫酸基含量的测定
  • 2.3 试验结果
  • 2.3.1 硫酸基含量的标准曲线
  • 2.3.2 正交试验结果
  • 2.4 讨论
  • 2.5 小结
  • 第三章 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对体外培养鸡胚成纤维细胞抗 IBDV 活性及其机制的研究
  • 3.1 试验材料
  • 3.1.1 原料与试剂
  • 3.1.2 液体配制
  • 3.1.3 主要仪器
  • 3.2 试验方法
  • 3.2.1 细胞培养及肽聚葡甘露聚糖硫酸酯细胞毒性测定
  • 3.2.2 鸡传染性法氏囊病毒 CCID50的测定（Reed-Muench 法）
  • 3.2.3 SPGM 抗IBDV 的作用方式
  • 3.3 结果与分析
  • 3.3.1 SPGM 对CEF 的细胞毒性
  • 3.3.2 病毒的半数细胞感染剂量 CCID50的测定
  • 3.3.3 SPGM 的抗IBDV 活性
  • 3.3.4 SPGM 抗IBDV 活性的机制
  • 3.4 讨论
  • 小结
  • 第四章 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对人工感染 IBDV 肉鸡的保护作用及相关免疫功能的影响
  • 4.1 试验材料
  • 4.1.1 病毒
  • 4.1.2 主要试验仪器及设备
  • 4.1.3 试验药品与试剂
  • 4.2 试验方法
  • 4.2.1 按 Reed-Muench 法测定 IBDV 半数感染量（EID50）
  • 4.2.2 动物分组及处理
  • 4.3 实验指标及测定方法
  • 4.3.1 死亡率和发病率
  • 4.3.2 淋巴细胞增殖反应试验
  • 4.3.3 白细胞介素-2（IL-2）的测定
  • 4.3.4 NO 含量及NOS 活性
  • 4.3.5 ND 抗体效价的检测
  • 4.4 数据处理
  • 4.5 试验结果
  • 4.5.1 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对人工感染 IBDV 雏鸡发病率及死亡率的影响
  • 4.5.2 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响
  • 4.5.3 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对血清 IL-2 的影响
  • 4.5.4 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对血清 NO 浓度和iNOS 活性的影响
  • 4.5.5 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对 ND 抗体效价的影响
  • 4.6 讨论
  • 4.6.1 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对肉鸡发病率、死亡率及新城疫抗体效价的影响
  • 4.6.2 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对脾脏淋巴细胞增殖的影响
  • 4.6.3 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对鸡血清 IL-2 的影响
  • 4.6.4 肽聚葡甘露聚糖硫酸酯对鸡血清 NO 及iNOS 活性的影响
  • 小结
  • 第五章 全文结论
  • 5.1 论文主要结论
  • 5.2 论文创新点
  • 5.3 有待进一步研究的问题
  • 参考文献
  • 致谢
  • 个人简历

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