葡萄胎发病相关基因F10表达及功能的初步研究

论文题目: 葡萄胎发病相关基因F10表达及功能的初步研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 人体解剖与组织胚胎学

作者: 周瑾

导师: 邢福祺

关键词: 葡萄胎,基因,原位杂交,荧光定量,干扰,凋亡

文献来源: 第一军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 葡萄胎(hydatidiform mole,HM),是一组与妊娠有关的良性妊娠滋养细胞疾病,在我国的平均发病率为约1/1000。葡萄胎具有潜在的恶性,可转变为侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌。葡萄胎的发生及恶性转化机制至今尚未完全清楚,除与其细胞遗传学特性有关外,一些癌基因的激活和抑癌基因的失活可能参与了其发生、发展的过程这一观点近年来受到关注。我们前期通过抑制性消减杂交技术,获得了正常早孕绒毛膜组织与葡萄胎组织之间的消减cDNA文库,并从中分离出一个在葡萄胎中高表达的新基因,暂按照工作序列号命名为F10。本课题通过原位杂交、荧光定量PCR技术及以基因沉默为基础的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术对F10的表达特性和功能进行了初步研究。本研究包括以下三个部分: 第1章F10基因在滋养细胞疾病及其它肿瘤组织中的原位杂交检测 1.1研究内容与研究方法选定的12例早孕绒毛组织、12例葡萄胎、6例侵袭性葡萄胎、8例绒癌、7例子宫内膜、6例宫颈上皮癌、9例卵巢腺癌、6例子宫内膜癌、8例乳腺癌、8例肝癌、6例胃癌切片均经HE染色后病理确诊。在首先制备地高辛标记的F10基因RNA探针的基础上,采用原位杂交的方法检测组织中F10基因mRNA的表达水平。

论文目录:

摘要

ABSTRACT

前言

第1章 F10在滋养细胞疾病及其他肿瘤组织的原位杂交检测

1.1 实验材料与设备

1.1.1 主要仪器设备

1.1.2 主要试剂

1.1.3 实验材料

1.1.4 常用溶液的配置

1.2 实验过程和方法

1.2.1 地高辛标记的F10 RNA探针制备与检测

1.2.2 原位杂交检测 F10基因的表达

1.3 结果

1.4 讨论

1.5 参考文献

第2章实时定量 PCR法分析 F10基因在正常妊娠滋养细胞与葡萄胎及其他肿瘤组织中的表达

2.1 实验材料与设备

2.1.1 主要仪器设备

2.1.2 主要试剂

2.1.3 标本来源

2.2 实验过程与方法

2.2.1 组织总 RNA的提取

2.2.2 RNA纯度及完整性鉴定

2.2.3 cDNA制备

2.2.4 荧光定量 PCR引物设计

2.2.5 荧光定量 PCR标准品的制备

2.2.6 T-载体连接

2.2.7 质粒 DNA转化大肠杆菌

2.2.8 质粒 DNA小量制备

2.2.9 荧光定量 PCR反应

2.3 结果

2.3.1 RNA纯度和完整性分析

2.3.2 F10基因在正常妊娠滋养细胞与葡萄胎、正常组织与不同肿瘤组织中表达检测

2.3.3 F10在肝癌和癌旁组织中的表达差异检测

2.4 讨论

2.5 参考文献

第3章 F10基因沉默对绒癌细胞增殖和凋亡的影响

3.1 实验材料与设备

3.1.1 主要仪器设备

3.1.2 主要试剂

3.1.3 细胞株来源

3.2 实验过程与方法

3.2.1 细胞培养

3.2.2 沉默 F10基因的小分子双链 RNA(dsRNA)制备及纯化

3.2.3 SiRNA定量

3.2.4 Lipofectamine 2000介导瞬间细胞转染

3.2.5 有效基因沉默的最佳dsRNA转染浓度和时间确定

3.2.6 MTT分析

3.2.7 细胞凋亡检测

3.3 结果

3.3.1 siRNA的定量

3.3.2 转染dsRNA后F10基因表达水平的检测

3.3.3 F10基因沉默对KLE细胞增殖的影响

3.3.4 F10基因沉默对绒毛膜癌KLE细胞凋亡影响

3.4 讨论

3.5 参考文献

全文结论

附录一英文缩写词表

附录二综述

成果

致谢

原创性声明及版权使用授权书

发布时间: 2006-01-06

参考文献

[1].滋养细胞疾病的遗传学研究[D]. 赵峻.中国协和医科大学2006
[2].血清hCG预测和全子宫切除术预防葡萄胎恶变的临床价值的研究[D]. 赵鹏.浙江大学2017

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