论文摘要
目的:食管癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,其发生、发展是一个多基因、多步骤的复杂过程。在食管上皮的癌变过程中,端粒酶及其相关成分基因和蛋白的表达发挥着重要作用。人类端粒酶逆转录酶（hTERT）是端粒酶成分中的限速亚单位,而hTERT的表达是受多方面因素的共同调控的。本研究通过对食管癌变过程中核因子-кB（NF-кB）、存活素（survivin）、c-myc和人类端粒酶逆转录酶（hTERT）在组织中的表达及相关性的研究,阐述癌变的可能机制,从而为食管癌的早期诊断、预后判断以及针对hTERT为靶点的基因治疗提供理论依据。方法1应用免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）方法检测了45例食管鳞状细胞癌组织,21例不典型增生组织和24例切缘正常组织中NF-кB、survivin、c-myc和hTERT蛋白的表达。2应用流式细胞技术（Flow Cytometry,FCM）对27例食管鳞状细胞癌组织、10例不典型增生组织和8例切缘正常组织中hTERT蛋白表达进行定量检测。3应用原位杂交技术（In Situ Hybridization,ISH）检测了45例食管鳞状细胞癌组织、21例不典型增生组织和24例切缘正常组织中hTERT mRNA的表达。结果1 hTERT在食管上皮不同病变中的表达采用ISH和IHC法分别检测hTERT mRNA和蛋白在45例食管鳞状细胞癌组织、21例不典型增生组织和24例切缘正常组织中的表达,其中原位杂交试验结果显示:hTERT mRNA在癌组织中的表达（84.4%）显著高于不典型增生组织（38.1 %）和切缘正常组织（4.2%）（P<0.05）;免疫组化结果显示,hTERT蛋白在癌组织中的表达（88.9%）显著高于不典型增生组织（57.1%）和切缘正常组织（12.5%）（P<0.05）。采用FCM法检测27例癌组织、10例不典型增生组织和8例切缘正常组织中hTERT蛋白表达量,其荧光指数（Fluorescence Index,FI）分别为1.59±0.14、1.25±0.17、1.00±0.19,三者之间差异有统计学意义（P<0.01）。综合IHC、ISH和FCM法检测结果,hTERT表达与患者年龄、性别、淋巴结转移及肿瘤的分化程度无关（P>0.05）;与食管癌的浸润深度有关（P<0.01）。食管癌组织中hTERT蛋白的表达与hTERT mRNA的表达有相关性（χ2=8.4586,P<0.01,c=0.3978）。2 c-myc在食管上皮不同病变中的表达采用IHC法检测45例食管鳞状细胞癌组织、21例不典型增生组织和24例切缘正常组织中的c-myc蛋白的表达发现,c-myc在癌组织中的表达（75.6%）明显高于不典型增生组织（52.4%）和切缘正常组织（16.7%）（P<0.05）。c-myc表达与患者年龄、性别及肿瘤的分化程度无关（P>0.05）;与食管癌的淋巴结转移、浸润深度有关（P<0.05）。3 survivin在食管上皮不同病变中的表达采用IHC法检测45例食管鳞状细胞癌组织、21例不典型增生组织和24例切缘正常组织中的survivin蛋白的表达发现,survivin在癌组织中的表达（82.2%）明显高于不典型增生组织（61.9%）和切缘正常组织（8.3%）（P<0.05）。IHC法检测结果显示,survivin表达与患者年龄、性别及肿瘤的分化程度无关（P>0.05）;与食管癌的淋巴结转移、浸润深度有关（P<0.05）。4 NF-кB在食管上皮不同病变中的表达采用IHC法检测45例食管鳞状细胞癌组织、21例不典型增生组织和24例切缘正常组织中的NF-кB蛋白的表达发现,NF-кB在癌组织中的表达（80.0%）明显高于不典型增生组织（57.1%）和切缘正常组织（20.8%）（P<0.05）。IHC法检测结果显示,NF-кB表达与患者年龄、性别、淋巴结转移及肿瘤的分化程度无关（P>0.05）;与食管癌的浸润深度有关（P<0.05）。5 hTERT mRNA与hTERT蛋白的关系在食管癌组织中hTERT mRNA的表达与hTERT蛋白的表达关系密切（χ2=8.4586,P<0.01,c=0.3978）。6 hTERT蛋白与NF-кB、survivin、c-myc蛋白的关系在食管癌组织中hTERT蛋白的表达分别与NF-кB蛋白（χ2=5.6250,P<0.05,c=0.3333）,survivin蛋白（χ2=6.8602,P<0.05,c=0.3646）,c-myc蛋白（χ2=17.3864,P<0.05,c=0.5279）的表达具有相关性。7 NF-кB蛋白与survivin、c-myc蛋白的关系在食管癌组织中NF-кB蛋白的表达分别与survivin蛋白（χ2=10.9840,P<0.05,c=0.4642）,c-myc蛋白（χ2=5.8957,P<0.05,c=0.3404）的表达有相关性。8 survivin蛋白与c-myc蛋白的关系在食管癌组织中survivin蛋白的表达与c-myc蛋白的表达有相关性（χ2=7.6294,P<0.05,c=0.3807）。结论1 hTERT mRNA和蛋白在食管癌组织中的表达明显高于不典型增生组织和正常食管粘膜组织,因而提示hTERT可能与食管癌的发生有关;hTERT与淋巴结转移及肿瘤分化程度无明显相关性;hTERT在有纤维膜浸润的原发性食管鳞癌中的表达明显高于无纤维膜浸润病例组,说明hTERT可能与食管癌的浸润有关;食管癌组织中hTERT蛋白的表达与hTERT mRNA的表达关系密切,提示hTERT蛋白的表达情况可以间接反映其mRNA表达水平,而且hTERT蛋白的高表达可能与hTERT基因转录水平的上调有关。2 c-myc蛋白在食管癌组织中的表达明显高于不典型增生组织和正常食管粘膜组织,因而提示c-myc可能与食管癌的发生有关;c-myc在有淋巴结转移的原发性食管鳞癌中的表达明显高于无转移病例组,提示c-myc可能与食管癌的转移有关;c-myc与肿瘤分化程度无明显相关性;c-myc在有纤维膜浸润的原发性食管鳞癌中的表达明显高于无纤维膜浸润病例组,说明c-myc可能与食管癌的浸润有关。3 survivin蛋白在食管癌组织中的表达明显高于不典型增生组织和正常食管粘膜组织,因而提示survivin可能与食管癌的发生有关;survivin在有淋巴结转移的原发性食管鳞癌中的表达明显高于无转移病例组,提示survivin可能与食管癌的转移有关;survivin与肿瘤分化程度无明显相关性;survivin在有纤维膜浸润的原发性食管鳞癌中的表达明显高于无纤维膜浸润病例组,说明survivin可能与食管癌的浸润有关。4 NF-кB蛋白在食管癌组织中的表达明显高于不典型增生组织和正常食管粘膜组织,因而提示NF-кB可能与食管癌的发生有关;NF-кB与淋巴结转移及肿瘤分化程度无明显相关性;NF-кB在有纤维膜浸润的原发性食管鳞癌中的表达明显高于无纤维膜浸润病例组,说明NF-кB可能与食管癌的浸润有关。5食管癌组织中hTERT蛋白的表达与NF-кB、survivin、c-myc蛋白的表达呈正相关,提示在食管癌的发生、发展过程中,NF-кB、survivin、c-myc可能上调hTERT的表达。6食管癌组织中NF-кB蛋白的表达与survivin、c-myc蛋白的表达呈正相关,提示在食管癌的发生、发展过程中,NF-кB与survivin、c-myc可能具有协同作用。7食管癌组织中survivin蛋白的表达与c-myc蛋白的表达呈正相关,提示在食管癌的发生、发展过程中,survivin与c-myc可能具有协同作用。