CTLA4-Ig融合蛋白对小鼠病毒性心肌炎作用及其机制的研究

论文摘要

目的探讨CTLA4-Ig融合蛋白对小鼠病毒性心肌炎的作用及其分子调控机制。方法选用106只4周龄健康雄性Balb/c小鼠,随机分为CTLA4-Ig组16只、病毒组40只、IgG组40只及正常对照组10只。CTLA4-Ig组、病毒组及IgG组小鼠腹腔接种0.15mLTCID50为109/mL的CVB3 Nancy株病毒液,正常对照组小鼠腹腔接种不含病毒的等量Eagle氏液。CTLA4-Ig组和IgG组的小鼠均于接种后6小时、72小时分别腹腔注射CTLA4-Ig 0.1mg/kg和非特异性小鼠IgG 0.1mg/kg。接种病毒后第7天处死所有小鼠,取外周血,应用ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ及IL-4的水平:取心脏,采用HE染色,在光镜下观察心肌病理变化并计算心肌病理积分,同时采用半定量RT-PCR法检测心肌组织中IL-2、IFN-γ、IL-4及CVB3mRNA的表达水平。结果1.Balb/c小鼠接种CVB3后,心肌炎的发病率为100%。光镜下可见心肌细胞变性、坏死和部分心肌纤维断裂,大量炎细胞浸润,呈现典型的病毒性心肌炎改变。2.CTLA4-Ig组小鼠的死亡率（50%）明显低于病毒组小鼠（80%）及IgG组小鼠（77.5%）（p均＜0.05）,心肌病理积分（1.61±0.12）亦明显低于病毒组小鼠（2.98±0.18）及IgG组小鼠（2.86±0.20）（p均＜0.01）。3.CTLA4-Ig组、病毒组及IgG组的小鼠心肌组织中CVB3mRNA的表达水平与心肌病理积分呈正相关（r=0.78,p＜0.01）。4.病毒组小鼠血清IFN-γ水平（196.3±18.8）明显高于正常对照组小鼠（26.24±8.5）（p＜0.01）,IL-4水平（50.8±7.8）明显低于正常对照组小鼠（146.5±15.2）（p＜0.01）,两组小鼠间IL-2水平无统计学差异（p＞0.05）。5.CTLA4-Ig组小鼠血清IFN-γ水平（32.5±7.6）明显低于病毒组小鼠（196.3±18.8）与IgG组小鼠（54.6±6.5）（p均＜0.01）,而IL-4水平（117.6±17.3）明显高于病毒组小鼠（50.8±7.8）与IgG组小鼠（51.9±9.5）（p均＜0.01）,三组小鼠间IL-2水平无统计学差异（p均＞0.05）。6.CTLA4-Ig组、病毒组及IgG组的小鼠血清IFN-γ水平与心肌病理积分呈正相关（r=0.65,p＜0.01）,血清IL-4水平与心肌病理积分呈负相关（r=-0.89,p＜0.01）,血清IL-2水平与心肌病理积分无明显相关性（r=0.18,p＞0.05）。7.病毒组小鼠心肌组织中IL-2 mRNA的表达水平（0.56±0.17）明显高于正常对照组小鼠（O）（p＜0.01）,IFN-γmRNA的表达水平（1.18±0.13）明显高于正常对照组小鼠（0.23±0.07）（p＜0.01）,而IL-4 mRNA的表达水平（0.13±0.02）明显低于正常对照组小鼠（0.46±0.15）（p＜0.01）。8.CTLA4-Ig组小鼠心肌组织中IL-2 mRNA的表达水平（0.28±0.10）明显低于病毒组小鼠（0.56±0.17）及IgG组小鼠（0.54±0.13）（p均＜0.01）,IFN-γmRNA的表达水平（0.64±0.18）明显低于病毒组小鼠（1.18±0.31）及IgG组小鼠（1.14±0.27）（p均＜0.01）,IL-4 mRNA的表达水平（0.44±0.12）明显高于病毒组小鼠（0.13±0.02）及IgG组小鼠（0.14±0.03）（p均＜0.01）。9.CTLA4-Ig组、病毒组及IgG组的小鼠心肌组织中IL-2、IFN-γmRNA的表达水平分别与心肌病理积分呈正相关（分别为r=0.75,p＜0.01;r=0.81,p＜0.01）,心肌组织中IL-4 mRNA的表达水平与心肌病理积分呈负相关（r=-0.76,p＜0.01）。10.CTLA4-Ig组、病毒组及IgG组的小鼠血清IL-2水平与心肌组织IL-2mRNA的表达水平呈低度正相关（r=0.55,p＜0.01）,血清IFN-γ浓度与心肌组织IFN-γmRNA的表达水平呈低度正相关（r=0.51,p＜0.01）,血清IL-4水平与心肌组织IL-4mRNA的表达水平呈高度正相关（r=0.88,p＜0.01）。结论1.VMC小鼠急性期心肌组织中IL-2、IFN-γmRNA的表达上调,与心肌病理积分呈正相关,IL-4 mRNA的表达下调,与心肌病理积分呈负相关;血清IFN-γ水平升高,与心肌病理积分呈正相关,IL-4水平降低,与心肌病理积分呈负相关。表明VMC小鼠急性期以Th1细胞反应为主,且Th1细胞反应的强弱一定程度上反映心肌炎症的轻重程度。2.CTLA4-Ig融合蛋白可使VMC小鼠死亡率明显降低,心肌炎症减轻,心肌病理积分降低,心肌组织CVB3mRNA表达下调,表明CTLA4-Ig融合蛋白对VMC小鼠具有一定的治疗作用。3.CTLA4-Ig融合蛋白可使VMC小鼠心肌组织IL-2、IFN-γmRNA表达下调,IL-4mRNA表达上调;使血清IFN-γ水平降低,IL-4水平升高。表明CTLA4-Ig融合蛋白可使VMC小鼠Th1反应减低,Th2反应增强,使Th1/Th2平衡向Th2偏移。4.CTLA4-Ig组、病毒组及IgG组的小鼠血清IFN-γ水平与心肌病理积分呈正相关,血清IL-4水平与心肌病理积分呈负相关。表明VMC小鼠外周血细胞因子IFN-γ与IL-4的含量变化在一定程度上反映心肌炎症的轻重程度,可作为临床VMC病情的监测指标。总之,VMC小鼠急性期存在Th1/Th2失衡,以Th1细胞反应为主。CTLA4-Ig融合蛋白可使VMC小鼠心肌炎症减轻,死亡率降低,其机制可能为通过抑制Th1细胞反应,增强Th2细胞反应,使Th1/Th2平衡向Th2偏移。CTLA4-Ig融合蛋白为临床治疗VMC提供了新思路。

论文目录

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• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 文献综述
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• 攻读硕士学位研究生期间发表的论文
• 学位论文评阅及答辩情况表