不同免疫方式对雏鸡免疫器官发育、细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

论文摘要

为研究不同免疫方式对雏鸡的应激以及对雏鸡免疫器官发育、细胞增殖、分化及凋亡相关基因表达的影响,揭示免疫应激对免疫器官发育抑制的机理,进行如下试验。试验设计选取1日龄健康固始鸡公雏240只,随机分为A、B、C、D四个处理,每个处理4个重复,每个重复15只鸡。其中A组为对照组,抓捕后放回原笼;B组采用ND-IB弱毒苗进行滴鼻点眼免疫;C组和D组均采用ND-IB弱毒苗和灭活苗进行滴鼻点眼和皮下注射免疫,且D组从7日龄起在日粮中添加维生素E（100 IU/kg）。所有鸡只于10日龄早上8:00进行免疫。试验一不同免疫方式对雏鸡应激敏感激素水平的影响于免疫后的1d、3d、5d和7d从每个处理每重复取3只鸡,称活体重,心脏采血,分离血清,ELISA试剂盒检测血清应激敏感激素促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质酮（CORT）的浓度,结果表明:滴鼻点眼和皮下注射免疫均对雏鸡造成一定应激;应激从免疫后第3d开始得到缓解;日粮添加VE（100IU/kg）能够有效缓解应激。试验二不同免疫方式对雏鸡体重与免疫器官发育的影响于免疫后的1d、3d、5d和7d从每个处理每重复取3只鸡,称活体重,分离胸腺、脾脏和法氏囊并称重,计算免疫器官指数。结果表明:不同免疫方式对雏鸡的体重均无显著影响;皮下注射免疫导致雏鸡胸腺重量显著增加,添加VE（100IU/kg）后雏鸡的胸腺重略有降低;不同免疫方式对雏鸡脾脏和法氏囊发育均无显著影响。试验三不同免疫方式对雏鸡免疫器官细胞增殖的影响于免疫后的1d、3d、5d和7d从每个处理每重复取1只鸡,分离胸腺、脾脏和法氏囊,采用流式细胞术检测免疫器官细胞周期百分比,包括:分裂间期1（G1期）、DNA合成期（S期）和有丝分裂期（M期）,计算细胞增殖指数。结果表明:皮下注射免疫导致雏鸡胸腺G1细胞比例在免疫后第3-5d时升高,抑制了胸腺细胞的增殖;添加VE（100IU/kg）后胸腺G1细胞比例降低,更多细胞进入DNA合成期;各组的脾脏细胞增殖指数在免疫后1-5d呈下降趋势。试验四不同免疫方式对免疫器官细胞凋亡相关基因表达量的影响于免疫后的1d、3d、5d和7d从每个处理每重复取1只鸡,分离胸腺、脾脏和法氏囊,提取总RNA,反转录出cDNA,用SYBR Green I做染料,以β-actin为参照基因,采用实时荧光定量PCR法检测抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Fas和FasL的相对表达量。结果表明:皮下注射免疫导致法氏囊Bcl-2的表达量显著降低,添加VE（100IU/kg）显著提高了FasL的表达量;胸腺和法氏囊内Bcl-2和FasL的表达量在免疫后第5d均显著提高,Fas和FasL的表达量也显著提高,共同参与细胞凋亡的调控。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 应激
• 1.1.1 应激的概念
• 1.1.2 常见的应激类型
• 1.1.3 应激的评价
• 1.1.4 应激与免疫器官发育
• 1.1.5 抗应激添加剂的研究
• 1.2 细胞增殖与细胞凋亡
• 1.2.1 细胞增殖
• 1.2.2 细胞凋亡
• 1.2.3 细胞凋亡的主要调控基因
• 1.2.4 细胞凋亡的检测
• 1.2.5 REAL‐TIMEPCR 技术及其应用
• 2 引言
• 3 试验内容
• 试验一 不同免疫方式对雏鸡应激激素水平的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物及分组
• 1.2 试剂与仪器
• 1.3 血清制备
• 1.4 血清学检测
• 1.5 数据处理
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 试验二 不同免疫方式对雏鸡体重与免疫器官发育的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验动物及分组
• 1.2 样品采集
• 1.3 数据处理
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 试验三 不同免疫方式对雏鸡免疫器官细胞增殖的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物及分组
• 1.2 样品采集
• 1.3 试剂配制
• 1.4 主要仪器设备
• 1.5 样品的处理
• 1.6 数据处理
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 试验四 不同免疫方式对免疫器官细胞凋亡相关基因表达的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物及分组
• 1.2 样品采集
• 1.3 RNA 的提取
• 1.4 RNA 质量的检测
• 1.5 反转录合成cDNA 反应
• 1.6 引物的合成与检测
• 1.7 REAL‐TIMEPCR 反应
• 1.8 数据处理
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 4 结论
• 参考文献
• Abstract