复方鸦胆子油亚微乳注射液的研究

论文摘要

鸦胆子油（Brucea javanica oil,BJO）和薏苡仁油（Coix seed oil,CSO）分别是苦木科植物鸦胆子的干燥成熟果实和禾木科植物薏苡的种仁中提取得到的脂肪油。本研究以开发具有减毒增效作用,能够用于恶性肿瘤辅助治疗的复方中药为目的,研制了复方鸦胆子油亚微乳注射液（BCOE）。BJO和CSO经精制后,对其理化性质进行了研究,符合注射用要求;建立柱前衍生化HPLC法,测定BJO和CSO中亚油酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸的含量分别为17.35%、8.65%、62.24%、5.51%,和21.18%、11.85%、50.85%、2.93%;影响因素试验结果表明BJO和CSO在40℃下稳定,对光照不稳定;根据不同配方比例对荷S180肉瘤小鼠的作用,确定BJO和CSO注射给药的优选配比为3:1。在脂肪乳注射液的经典处方基础上,以卵磷脂为乳化剂,油酸钠为pH调节剂和稳定剂,以粒径及粒度分布、ζ-电位、稳定性参数KE、pH为主要评价指标,对BCOE制备过程中高压均质温度、均质压力及次数、灭菌条件等主要工艺因素,以及卵磷脂的用量、辅助乳化剂（吐温80、F-68、油酸钠）的用量、pH等处方因素进行了单因素考察,确定了BCOE的基本处方为:油相10%（BJO 7.5%、CSO 2.5%）、卵磷脂1.2%、吐温80 0.1%、油酸钠0.03%,基本工艺参数为:高压均质压力80 Mpa、均质6次、灭菌前调节pH至8.0、115℃高压灭菌30 min。以优化处方及工艺制备的BCOE,经性状,鉴别,粒径及粒度分布、pH、表面电性等检查,以及脂肪酸含量测定等质量研究,其粒径及粒度分布、pH、ζ-电位分别为213.7±50.0nm、7.51和-30.24 mV,柱前衍生化HPLC法测定的亚油酸、棕榈酸、油酸和硬脂酸含量分别为13.07、8.98、44.04、3.30 mg/g,为BCOE质量评价体系的建立提供了依据。振摇及冻-融稳定性试验结果说明,剧烈振摇及剧烈的温度变化都会影响BCOE的稳定性,因此乳剂储存及运输过程应避免剧烈振摇,以及温度剧烈变化,不可冷冻。BCOE经40℃加速试验3个月、25℃加速试验6个月和6℃长期试验18个月后,其外观、粒径及粒度分布、pH和脂肪酸含量等均无显著变化。建立了UPLC-MS法测定大鼠血浆中三油酸甘油酯和油酸,并用于BCOE大鼠体内药物动力学研究。大鼠股静脉注射BCOE（10、5.0、2.5 ml/kg）、鸦胆子油乳（BJOE,7.5 ml/kg）及薏苡仁油乳（CSOE,2.5 ml/kg）,以非房室模型分析药物动力学参数。根据AUC判断,油酸的药时过程符合线性动力学;而三油酸甘油酯在2.5～10 ml/kg剂量范围内呈现非线性动力学特征,高剂量组（10 ml/kg）的药时过程符合非线性动力学米氏方程,其平均Vmax、KM和分布容积（V）分别为31.99±7.95μmol/L/min、878.32±345.96μmol/L和60.55±8.29ml/kg,2.5～7.5 ml/kg剂量组符合线性动力学。BCOE高、中、低三个剂量组中三油酸甘油酯和油酸的AUC、Cmax随着给药剂量增加而显著增大,高、低剂量组间均有显著性差异（P<0.05或P<0.01）;BCOE高剂量组中三油酸甘油酯和油酸的Cl最低,与中、高剂量组相比有显著性差异（P<0.05或P<0.01）,而中、低剂量组间无显著差异。BCOE高剂量组三油酸甘油酯的AUC、V和Cl,油酸的tmax与BJOE组比较有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。BCOE高剂量组三油酸甘油酯的AUC、Cmax、tmax、V和Cl,油酸的AUC、tmax和V与CSOE组比较均有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。此结果主要是由于给药剂量不同,甘油三酯在大鼠体内的代谢途径发生改变所致。本文UPLC-MS法的建立及其在药物动力学研究中的应用具有创新意义,研究结果在国内外尚无文献报道。安全性实验结果表明,BCOE体外溶血试验未见溶血性及促血细胞凝集作用;对家兔耳血管未见明显刺激性;在主动过敏反应试验中,对受试的个别豚鼠有弱的致敏作用;在被动皮肤过敏反应试验中,对受试大鼠无致敏作用。急性毒性实验结果显示,按小鼠所容许的最大给药容积1日内静注给药3次（相当于拟临床人用量15 ml/kg的8倍）,动物100%存活且无明显中毒表现。说明BCOE临床使用安全。药效学试验结果表明,相同剂量（10 ml/kg×7d,iv）下,BCOE对荷S180肉瘤小鼠的抑瘤率为44.2%～49.5%,高于CSOE和BJOE,并明显高于口服给药;可延长荷EAC小鼠的生存时间,生命延长率分为29.4%～38.7%,低于CSOE但高于BJOE,并明显高于口服给药;其抑瘤作用和生命延长作用呈剂量依赖性。BCOE可减轻CTX和5-Fu对正常小鼠的毒副作用;与CTX合用可明显增强其抑瘤作用。说明BCOE具有抗肿瘤作用,并对化疗药物具增效减毒作用。此复方药效结果在国内外尚无文献报道。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1.鸦胆子油的研究概述
• 2.薏苡仁油的研究概述
• 3.亚微乳剂的研究概述
• 4.课题的研究目的与意义
• 参考文献
• 第一章 复方鸦胆子油亚微乳注射液的处方前研究
• 1 仪器和材料
• 1.1 仪器
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 实验动物
• 1.4 瘤株
• 2 方法与结果
• 2.1 原料油的精制
• 2.2 原料油的理化性质研究
• 2.3 原料油的鉴别
• 2.4 原料油的含量测定
• 2.5 原料油的影响因素考察
• 2.6 药效学筛方试验
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 参考文献
• 第二章 复方鸦胆子油亚微乳注射液的处方设计及制备工艺研究
• 1 仪器和材料
• 1.1 仪器
• 1.2 药品与试剂
• 2 方法与结果
• 2.1 乳剂的评价指标及方法
• 2.2 基本处方及工艺
• 2.3 制备工艺研究
• 2.4 处方因素研究
• 2.5 灭菌条件的考察
• 2.6 处方及工艺的确定
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 参考文献
• 第三章 复方鸦胆子油亚微乳注射液的质量及稳定性研究
• 1 仪器和材料
• 1.1 仪器
• 1.2 药品与试剂
• 2 方法与结果
• 2.1 质量研究
• 2.1.1 性状
• 2.1.2 鉴别
• 2.1.3 粒径及粒度分布
• 2.1.4 表面电性
• 2.1.5 pH
• 2.1.6 脂肪酸含量测定
• 2.2 稳定性研究
• 2.2.1 考察项目
• 2.2.2 振摇试验
• 2.2.3 冻-融试验
• 2.2.4 长期稳定性
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 参考文献
• 第四章 复方鸦胆子油亚微乳注射液的药物动力学研究
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 实验动物
• 2 方法与结果
• 2.1 实验条件
• 2.2 血浆样品的处理
• 2.3 方法学验证
• 2.4 大鼠体内药物动力学研究
• 2.4.1 给药方案与样品采集
• 2.4.2 测定结果
• 2.4.3 药物动力学参数分析
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 参考文献
• 第五章 复方鸦胆子油亚微乳注射液的安全性及初步药效学研究
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 实验动物
• 1.4 瘤株
• 2 方法与结果
• 2.1 血管刺激性试验
• 2.2 体外溶血试验
• 2.3 全身主动过敏试验
• 2.4 被动皮肤过敏试验
• 2.5 急性毒性试验
• 180肉瘤小鼠瘤重的影响'>2.6 对荷S₁₈₀肉瘤小鼠瘤重的影响
• 2.7 对荷EAC小鼠生存时间的影响
• 2.8 对CTX所致正常小鼠毒性的保护作用
• 2.9 对5-FU所致正常小鼠毒性的保护作用
• 2.10 对CTX的增效作用
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢
• 攻读博士学位期间发表论文情况
• 附件