口蹄疫VP1表位六聚体（FMD-VP1-Hetero6）重组蛋白疫苗

论文题目: 口蹄疫VP1表位六聚体（FMD-VP1-Hetero6）重组蛋白疫苗

论文类型: 博士论文

论文专业: 免疫学

作者: 邵明玉

导师: 于永利

关键词: 口蹄疫,疫苗

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: 口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是一种高度传染性的疾病,主要发生于牛、羊、猪等偶蹄类动物。口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)是引起该病的病原体。由于口蹄疫的高度传染性和对农业经济的重大影响,国际兽医局(OIE)将其列为A 类传染病。FMDV 衣壳蛋白VP1 是最主要的抗原蛋白,VP1 刺激机体产生的抗体具有中和保护作用,细胞免疫对抗体的产生有辅助作用。本论文在设计抗FMDV 重组蛋白疫苗选择VP1 蛋白为靶点,具体选择O 型FMDV VP1的B 细胞表位(140-160aa)和T 细胞表位(20-40aa)和(200-213aa)经重复多次组成FMD-VP1-Hetero6 重组蛋白。我们用基因工程的办法合成并且纯化获得了FMD-VP1-Hetero6 重组蛋白,功能实验的结果显示:FMD-VP1-Hetero6 刺激豚鼠产生了高滴度的保护性中和抗体,在乳鼠中和保护实验中保护效价达到1:1024。本研究的主要创新点在于:基于前人的研究基础,我们设计了B 细胞表位和两种不同T 细胞表位交叉多次重复的疫苗结构,该结构未见文献报道,为我们首次提出,功能实验证明此重组蛋白免疫豚鼠的血清在乳鼠中和实验中对同型的FMDV 的感染具有显著的保护作用。

论文目录:

前言

文献回顾

1 口蹄疫病毒(FMDV)研究简介

1.1 FMDV 基因组的结构和功能

1.1.2 FMDV RNA 3’UTR

1.1.3 FMDV RNA 蛋白编码区ORF

1.2 FMDV 基因组编码的结构蛋白及其功能

2 FMD 的流行病学研究

2.1 口蹄疫病毒感染需要的最小病毒剂量

2.2 口蹄疫病毒的分泌

2.3 口蹄疫病毒的播散

3 FMD 疫苗的研究进展

3.1 传统疫苗

3.2 基因工程亚单位疫苗

3.3 转基因植物疫苗

3.4 合成肽苗

3.5 融合蛋白质疫苗

3.6 基因缺失疫苗

3.7 病毒载体疫苗

3.8 核酸疫苗

材料和方法

1 引物的设计

2 主要试剂

2.1 限制性内切酶及其它试剂

2.2 质粒与菌株

2.3 培养基

2.4 实验动物及其他

3 主要方法

3.1 用PCR 法搭建的方法分别构建BT1 和BT2 基因片段

3.2 BT1 和BT2 基因片段的TA 克隆

3.3 pMD18-T-FMD-VP1-Hetero-6 重组质粒的构建和测序

3.4 pET28a-FMD-VP1-Hetero-6 重组质粒的构建和测序

3.5 pET28a-FMD-VP1-Hetero-6 重组质粒大肠杆菌BL21 中的表达

3.6 Western blot 鉴定

3.7 pET28a-FMD-VP1-Hetero-6 重组蛋白的纯化

3.8 FMD-VP1-Hetero-6 免疫豚鼠

3.9 FMD-VP1-Hetero-6 免疫豚鼠血清Elisa 检测

3.10 FMD-VP1-Hetero-6 免疫豚鼠血清的乳鼠中和实验

实验结果

1 用PCR 法搭建的方法分别构建BT1 和BT2 基因片段

2 BT1 和BT2 基因片段的TA 克隆

3 pMD18-T-FMD-VP1-Hetero-6 重组质粒的构建和测序

4 pET28a-FMD-VP1-Hetero-6 重组质粒的构建和测序

5 pET28a-FMD-VP1-Hetero-6 重组质粒大肠杆菌BL21 中的表达和纯化

6 FMD-VP1-Hetero-6 免疫豚鼠血清Elisa 检测

7 FMD-VP1-Hetero-6 免疫豚鼠血清的乳鼠中和实验

图片和照片

讨论

1 口蹄疫病毒疫苗设计过程中的蛋白质分子设计

2 FMD-VP1-Hetero-6 重组蛋白免疫功能试验问题的讨论

3 FMD-VP1-Hetero-6 重组蛋白免疫实验中遇到的一些问题的分析

4 未来工作的设想

结论

参考文献

创新性声明

攻读博士期间发表的学术论文和其它成果

中文摘要

Abstract

发布时间: 2005-08-26

参考文献

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• [3].衣原体噬菌体PhiCPG1衣壳蛋白Vp1对沙眼衣原体作用机制研究[D]. 郭媛丽.天津医科大学2016
• [4].口蹄疫病毒VP1蛋白抑制细胞Ⅰ型干扰素产生的分子机理[D]. 李夏莹.中国农业大学2014
• [5].亚洲1型FMDV RGD基序和VP1第154位突变对宿主致病性的影响[D]. 连凯琪.中国农业科学院2015
• [6].口蹄疫病毒VP1抗原基因在模式植物叶绿体中的重组和表达[D]. 孙萌.浙江大学2003
• [7].表达O型口蹄疫病毒VP1基因的重组牛疱疹病毒1型的构建及其在兔体内的免疫原性研究[D]. 任宪刚.中国农业科学院2009
• [8].衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1单克隆抗体的制备及初步应用[D]. 侯淑萍.天津医科大学2010
• [9].衣原体噬菌体Chp3衣壳蛋白VP1的表达及蛋白间作用的研究[D]. 姚卫锋.天津医科大学2010
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