骨炎定对一氧化氮抑制人类软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响

论文摘要

目的 观察骨炎定对体外培育的人软骨细胞增殖以及在白细胞介素-1影响下诱导型一氧化氮合酶和Ⅱ型胶原基因表达的影响,在细胞和分子水平对骨炎定保护软骨的作用机制进行研究。 方法 从人工关节置换手术中取出的人类关节软骨中分离出软骨细胞,将其分为空白对照组、IL-1组、IL-1+L-NAME组和IL-1+骨炎定组,应用血清药理学的方法进行给药和离体培养,用MTT法观察各组软骨细胞增殖的差异,应用逆转录聚合酶链技术观察骨炎定对软骨细胞诱导型一氧化氮合酶、Ⅱ型胶原mRNA表达的影响,了解骨炎定保护软骨的作用机制。 结果 骨炎定含药血清用于体外培养人软骨细胞时,对软骨细胞的增殖有一定的促进作用;在IL-1作用下,软骨细胞诱导型一氧化氮合酶的表达明显增加,加入一氧化氮合酶抑制剂L-NAME后,一氧化氮合酶的表达明显减少,接近于空白对照组,骨炎定含药血清也能够对抗IL-1的作用,令软骨细胞一氧化氮合酶的表达接近于空白对照组。同时,在IL-1作用下,软骨细胞Ⅱ型胶原的表达会明显减少,而一氧化氮合酶抑制剂L-NAME和骨炎定含药血清都能使Ⅱ型胶原的表达增加。 结论 骨炎定对软骨细胞的增殖有一定的促进作用,结合骨炎定对体外培育的人软骨细胞在IL-1作用下诱导型一氧化氮合酶、Ⅱ型胶原mRNA表达影响的观察发现,这种促进增殖的作用有可能是通过对抗前炎症细胞因子IL-1诱导产生一氧化氮并抑制Ⅱ型胶原合成的机制而实现的,表明骨炎定对软骨中的软骨细胞和胶原成分都具有一定的保护作用。

论文目录

• 引言
• 一 中医对骨关节炎的认识
• 1、中医古代文献中骨关节炎的病因病机
• 2、古代对骨关节炎治疗的认识
• 3、现代中医对骨关节炎治疗的研究
• 3.1 内治法
• 3.2 外治法
• 3.3 中医药治疗骨关节炎的现代研究
• 3.3.1 对软骨细胞凋亡的影响
• 3.3.2 软骨细胞保护作用
• 3.3.3 软骨胶原保护作用
• 3.3.4 抑制滑膜炎症
• 3.3.5 抑制自由基损伤
• 二 现代医学对骨关节炎与一氧化氮、II型胶原的研究
• 1、骨关节炎的发病机理研究
• 1.1 骨内静脉淤滞及骨内高压学说
• 1.2 关节内部力平衡失调学说
• 2、软骨细胞在骨关节炎发病机理中的作用
• 2.1 软骨细胞的增殖和凋亡
• 2.2 软骨细胞与基质之间的交互作用
• 3、骨关节炎与II型胶原
• 3.1 关节软骨的组织和构成
• 3.2 关节软骨的老化和骨关节炎的发生
• 3.3 软骨变性的调控机制
• 3.4 小结
• 4、骨关节炎与一氧化氮
• 4.1 一氧化氮
• 4.2 一氧化氮合酶
• 4.3 一氧化氮在关节中的代谢
• 4.4 一氧化氮和细胞因子在慢性炎症中的作用
• 4.5 一氧化氮水平的调控
• 4.6 NO对蛋白聚糖的影响
• 4.7 NO和蛋白水解酶
• 4.8 NO和胶原
• 4.9 小结
• 三 骨炎定治疗骨关节炎的临床与实验研究现状
• 1. 陈基长教授对骨关节炎中医防治的观点
• 1.1 肾虚为本，血瘀为标
• 1.2 骨炎定拟方依据
• 1.3 临床运用
• 2. 骨炎定相关实验研究
• 四 临床观察
• 五 实验研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 组织材料
• 1.2 动物
• 1.3 主要仪器和设备
• 1.4 主要试剂和药物
• 1.4.1 分离及培养细胞试剂
• 1.4.2 检测试剂
• 1.4.3 骨炎定方组成
• 1.5 骨炎定含药血清的制备
• 1.6 软骨细胞的培养
• 1.7 分组
• 1.8 含药血清对软骨细胞增殖的影响
• 1.9 NO的测定
• 1.10 iNOS及II型胶原总RNA提取和半定量RT-PCR
• 1.11 统计学分析
• 2. 结果
• 2.1 MTT法测软骨细胞增殖
• 2.2 一氧化氮含量测定
• 2.3 一氧化氮合酶mRNA表达
• 2.4 II型胶原表达
• 六 讨论
• 1. 骨关节炎发生发展的微观机制
• 2. IL-1和NO在本研究中的意义
• 3. 本研究的设计思路
• 4. 实验结果分析
• 4.1 骨炎定对软骨细胞增殖的影响
• 4.2 骨炎定对NO含量和iNOS基因表达的影响
• 4.3 骨炎定对II型胶原基因表达的影响
• 5. 小结
• 结语
• 参考文献
• 在校期间发表论文
• 致谢