论文摘要
目的:研究小鼠胎肝间充质干细胞是否具有向胰岛β样细胞分化的潜能及是否可用于治疗1型糖尿病。 方法:无菌条件下,通过贴壁筛选法从正常C57BL/6j胎鼠（孕11.5～15.5天）肝脏中分离出胎肝间充质细胞,在DMEM/F12（+10%FBS）培养液中贴壁培养;传第3代后,用高浓度葡萄糖（25mM）培养液DMEM（+10%FBS）以及bFGF（basic Fibroblast Growth Factor）和尼克酰胺诱导胎肝间充质干细胞向胰岛β样细胞分化。倒置显微镜下观察胎肝间充质干细胞诱导后形态变化,观察是否形成细胞簇;用RT-PCR检测诱导后的细胞是否表达胰岛β细胞的特异分子标志如胰十二指肠同源异型看家基因盒-1（pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1）、胰岛素原-1（proinsulin-1,INS-1）、葡萄糖转运子2（glucose transporter-2,Glut2）:在诱导细胞形成细胞簇后,用胰岛β细胞特异染色方法双硫腙染色鉴定诱导后细胞内是否含有高浓度游离锌离子;免疫细胞化学（Envision法）鉴定诱导后细胞内是否储存有胰岛素;制作1型糖尿病小鼠模型,并将诱导后的细胞移植到1型糖尿病小鼠体内,连续6周观察血糖变化,鉴定细胞是否有葡萄糖反应性分泌胰岛素的功能。 结果:用经典的贴壁筛选法可以得到形态均一的纺锤体样胎肝间充质干细胞。第3代胎肝间充质细胞经过高糖等诱导后,胎肝间充质细胞形成细胞簇;RT-PCR显示诱导后细胞PDX-1、INS-1、Glut2均有表达,而未诱导的细胞则没有表达或未检测到表达;间充质干细胞形成了双硫腙染色阳性的细胞簇（每个T-25培养瓶有80-120个）;免疫细胞化学表明细胞簇内的细胞胰岛素染色强阳性;移植到糖尿病小鼠体内后,小鼠高血糖出现逆转;取出移植物,小鼠高血糖从新出现,并很快死亡;移植物作免疫组织化学染色,可以观察到肾被膜下区含有大量胰岛素阳性细胞,并且没有淋巴细胞浸润。 结论:从胎肝中分离出的间充质干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛β样细胞,这种胰岛β样细胞具有表达、储存和葡糖糖反应性分泌胰岛素的功能。胎肝间充质干细胞可能是糖尿病再生治疗的理想细胞来源。
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