论文摘要
研究背景：晚期糖基化终产物(advanced glycation end products，AGEs)是体内蛋白质中赖氨酸部分、脂类或核酸与还原糖的羰基在无酶的条件下发生反应，形成Schiff碱，经Amadori反应重排后形成相对稳定的糖基化产物。AGEs主要通过与其细胞表面特异受体—RAGE(receptor for advanced glycation end products)的相互作用，导致氧化应激、扩大免疫／炎症反应、损伤内皮细胞功能、促进胶原蛋白交联、诱导心肌细胞凋亡等一系列病理反应，对心血管系统产生损伤。我们早期研究发现AGEs可明显增加心肌细胞的凋亡率，通过与RAGE增高胞内游离钙浓度，影响心肌细胞舒缩功能，而抗RAGE抗体可以阻断其作用。有研究报道在糖尿病(DM)患者动脉粥样硬化斑块中RAGE高度表达。因此，RAGE被认为是介导AGEs对心血管系统损伤的重要受体，可以作为研究血管疾病的侯选基因之一和药物干预性研究的新靶点。RAGE基因位于人白细胞A位点附近的染色体6p21.3。自1998年Hudson等检测出一功能性氨基酸变异—位于RAGE基因外显子Excon3密码子82的甘氨酸突变成丝氨酸(Gly→Ser)，产生Alul限制性酶切位点(AG↓CT)，形成G82S多态现象以来，体外研究发现在中国仑鼠卵巢细胞(CHOs)和人类单核细胞中，S等位基因的配体结合亲合力强于G等位基因，且配体激活产生的炎症介质增加，具有扩大免疫／炎症反应的作用，提示RAGE基因G82S(G／S)多态性潜在性地增强心血管疾病的发病、发展。目的：以2004年7月～2005年12月广州南方医院心内科住院病人(共700例)为研究对象，应用多聚酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)的方法检测上述入选对象RAGE基因G82S多态性基因型，试图探讨这一遗传变异对我国高血压(HP)、糖尿病(DM)和冠心病(CHD)人群疾病易感性的影响，以及通过比较我国与其他不同国家、不同种族之间RAGE基因G82S多态性的频率分布来了解该基因多态的分布特点，为进一步阐明RAGE基因G82S多态性与复杂性状疾病(如心血管疾病、糖尿病等)的关系提供强有力的流行病学依据。方法：以2004年7月～2005年12月广州南方医院心内科无血缘关系的住院病人(共700例)为研究对象，抽取其静脉血并提取基因组DNA，应用多聚酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)的方法检测上述入选对象RAGE基因G82S多态性基因型；1)首先将入选对象分为HP组(合并／不合并有CHD或DM，355例)、DM组(合并／不合并有HP或CHD，170例)、CHD组(合并／不合并有HP或DM，330例)和对照组(CTRL组，170例)，比较各疾病组与CTRL组间RAGE基因G82S(G／S)多态性的频率分布有无差异来探讨该多态变异与我国HP、DM和CHD疾病易感性的相关性；2)将上述入选对象分为不伴CHD的HP组(200例)、CHD&HP组(175例)、不伴HP的CHD组(155例)和CTRL组(170例)，比较各疾病组与CTRL组间G82S(G／S)多态性的频率分布来进一步探讨该遗传变异对我国HP、CHD&HP和CHD人群相关疾病易感性的影响；3)为探讨合并／不合并DM对RAGE基因G82S(G／S)多态性在我国HP、CHD&HP以及CHD中的频率分布有否影响，在上述分组的基础上进行亚组分析，分为单纯HP组(126例)、HP&DM组(74例)、CHD&HP&DM组(59例)、CHD&DM组(37例)、CHD&HP组(96例)、单纯CHD组(138例)和CTRL组(170例)，比较各组间G82S(G／S)多态性的频率分布来进一步探讨该基因多态性与我国HP、HP&DM、CHD&HP&DM、CHD&DM、CHD&HP以及CHD之间的相关性；根据目前国内外已进行的RAGE基因G82S突变点的相关性研究，结合本实验研究结果，比较我国汉族人群、DM及CHD人群与不同国家、种族之间RAGE基因G82S多态性的频率分布，进一步了解该遗传变异在中国汉族人中的分布特点，以及对疾病易感性的影响是否存在地域和种族的差异。结果：一、RAGE基因G82S多态性对我国HP、DM以及CHD人群疾病易感性的影响CHD组患者G82S多态性SS基因型频率分布显著高于CTRL组(x~2=18.119，P＜0.001，根据Bonferroni方法以a′=0.017为检验水平，P＜0.017)：其等位基因S频率与CTRL组比较有显著性差异(x~2=16.285，P=0.000，P＜0.017)，OR值为2.081，95％CI为(1.450，2.985)；HP组和DM组患者G82S基因型(GG、GS、SS)和等位基因(G、S)频率与CTRL组比较均无显著性差异(P＞0.017)。分层x~2检验提示G82S多态性突变型(GS&SS)与男性CHD患者的发病显著相关。二、RAGE基因G82S多态性对我国HP、CHD&HP以及CHD人群疾病易感性的影响CHD组与CHD&HP组患者G82S多态性SS基因型频率分布显著高于CTRL组(x~2值分别为19.637和9.126，P值分别为0.000和0.010，根据Bonferroni方法以a′=0.017为检验水平，P＜0.017)；其等位基因S频率与CTRL组比较有显著性差异(x~2值分别为17.757和8.546，P值分别为0.000和0.003，P＜0.017)，OR值分别为2.303和1.842，95％CI为(1.553，3.416)和(1.219，2.785)；HP′组G82S基因型(GG、GS、SS)和等位基因(G、S)频率与CTRL组比较无显著性差异(P＞0.017)。分层x~2检验提示G82S多态性突变型(GS&SS)与男性CHD患者、年龄≥60岁的CHD&HP患者的发病显著相关；二分类Logistic回归分析表明G82S(G／S)突变基因型GS&SS为CHD的发病的一项重要危险因素，与CHD&HP的发病也存在一定相关性，但与HP的发病无关。三、RAGE基因G82S多态性对我国HP、CHD和(或)合并2型DM人群疾病易感性的影响单纯CHD组患者G82S多态性SS基因型频率分布显著高于CTRL组(x~2=20.716，P＜0.001，根据Bonferroni方法以a′=0.008为检验水平，P＜0.008)，而单纯CHD组与CHD&HP组中等位基因S频率与CTRL组比较有显著性差异(x~2值分别为18.869和8.256，P值分别为0.000和0.004，P＜0.008)，OR值分别为2.446和1.949，95％CI为(1.622，3.689)和(1.230，3.087)；单纯HP组、HP&DM组、CHD&HP&DM组和CHD&DM组G82S基因型(GG、GS、SS)和等位基因(G、S)频率与CTRL组比较均无显著性差异(P＞0.008)。分层x~2检验提示G82S多态性突变型(GS&SS)与男性CHD患者的发病显著相关；二分类Logistic回归分析表明G82S(G／S)突变基因型GS&SS为CHD发病的一项重要危险因素，与CHD&HP、CHD&HP&DM的发病也存在一定相关性。四、我国汉族人群、DM人群及CHD人群与不同国家、不同种族之间RAGE基因G82S多态性频率分布的比较1．我国汉族人群与其他国家、种族之间RAGE基因G82S多态性的分布差异本研究报道的G82S多态性突变型(GS&SS)在中国汉族人群的分布(25.3％)虽然低于刘丽梅报道的(43.3％，x~2=9.563，P=0.002)，而与亚洲韩国人(30.2％，x~2=1.612，P=0.204)的分布相似，但显著高于英国白种人(13％)、美国白种人(8％)、芬兰人(7％)、巴西人(3.7％)、亚洲印度人(2％)和捷克白种人(1.8％)(P＜0.01)；其等位基因S的频率分布，在中国人群的分布(13.2％)虽然低于刘丽梅报道的(23.1％，x~2=8.871，P=0.003)，而与亚洲日本人(17.3％)、亚洲韩国人(16％)的分布相似(x~2值分别为2.452和1.524，P值分别为0.117和0.217)，但显著高于英国白种人(8％)、芬兰人(4％)、巴西人(1.8％)、亚洲印度人(2％)和捷克白种人(0.9％)(P＜0.01)。2．我国DM人群与其他国家、种族之间RAGE基因G82S多态性的分布差异本研究报道G82S多态性突变型(GS&SS)在中国DM人群的分布(35.9％)与刘丽梅报道(33.8％)的相似(x~2=0.085，P=0.770)，但显著高于亚洲印度DM人(20％)、芬兰DM人(15％)、捷克白种DM人(7.6％)、美国白种DM人(7.3％)、英国白种DM人(7％)和巴西DM人(2.1％)(P＜0.01)；其等位基因S的频率分布，在中国DM人群的分布(19.1％)与刘丽梅报道(17.7％)的相似(x~2=0.126，P=0.723)，高于亚洲印度DM人(11％，x~2=6.140，P=0.013)，而显著高于亚洲日本DM人(10.8％)、芬兰DM人(7％)、捷克白种DM人(3.8％)、英国白种DM人(4％)和巴西DM人(1％)(P＜0.01)。3．我国CHD人群与其他国家、种族之间RAGE基因G82S多态性的分布差异本研究报道G82S多态性突变型(GS&SS)在中国CHD人群的分布(48％)显著高于亚洲韩国人(24.8％，x~2=37.041，P＜0.001)、芬兰人(12％，x~2=76.972，P＜0.001)和美国人(6.8％，x~2=60.432，P＜0.001)；其等位基因S的频率分布，在中国人群的分布(26.0％)显著高于韩国人(13.0％，x~2=35.330，P＜0.001)和芬兰人(6.0％，x~2=77.616，P＜0.001)。结论：一、RAGE基因G82S(G／S)多态性是中国汉族人群冠心病的易感基因，与冠心病的发病存在明显相关性，是冠心病的发病的一项重要危险因素。二、RAGE基因G82S(G／S)多态性在中国汉族人群男性冠心病的致病易感性更为显著。三、RAGE基因G82S(G／S)多态性并非中国汉族人群高血压、2型糖尿病的易感基因，与中国汉族人群高血压、2型糖尿病的发病、发展无明显关联。四、与其他国家、种族相比，RAGE基因G82S(G／S)多态性在中国汉族人群、中国2型糖尿病人群及中国冠心病人群呈现高分布频率。