生物样本有机磷农药及中枢神经系统药物GC-MS检测方法的建立与临床应用

论文摘要

化学性毒物中毒事件属突发卫生事件,给人们正常生活、社会安全稳定造成较大影响。在我国,化学性毒物中毒主要以有机磷农药中毒和神经系统药物为主。目前有机磷农约中毒的诊断多采用测定血液中胆碱酯酶活度法,但无法判定何种有机磷农药中毒,更不能确定血液中游离有机磷农药的血浓度,故无法为临床医生有机磷农药中毒的救治和预后提供及时准确的参考依据。神经系统药物中毒患者常表现为昏睡不醒,或不予配合难,难以提供服药史,诊断十分困难。多依靠家属或现场见证人提供的药物接触史和相应临床表现,缺少特异性临床诊断指标,因此给急诊医生的诊断和抢救带来极大困难。在中毒事件发生的第一时间明确分析出中毒物质种类及其血浓度,有助于明确诊断,有助于临床医生制定出科学、合理、及时的救治方案。本文的研究目标是建立灵敏、准确、快速的常见中毒药物定性和定量分析方法,并用于常见的、严重危害人们健康的多种药物分析,为中毒临床病因诊断提供依据。本研究建立测定人血浆中8种有机磷农药对硫磷、马拉硫磷、乐果、敌敌畏、甲胺磷、灭线磷、喹硫磷、毒死蜱等的气相色谱-质谱（GC-MS）定性、定量分析方法。并应用于临床有机磷药物中毒抢救指导。血浆样品经乙酸乙酯提取,采用GC-MS作为定性分析工具,将保留时间、特征离子和谱库检索相结合实行多指标定性。咖啡因为内标,采用选择离子模式定量。血浆中8种有机磷农药对硫磷、马拉硫磷、乐果、敌敌畏、甲胺磷、灭线磷、喹硫磷、毒死蜱浓度在0.2～10.0μg·ml-1。内具有良好的线性关系,最低检出浓度约为0.07μg·ml-1。回收率为56.67%～88.36%,日内RSD＜9.15%,日间RSD＜10.48%。本研究已完成21例患者的鉴别分析及定量分析,未出现阴性报告或假阳性报告,所有阳性报告均得到实验室胆碱酯酶检查和中毒史追溯证实。本研究建立测定人血浆中6种中枢神经系统药物苯巴比妥、酰胺咪嗪、地西泮、硝西泮、艾司唑仑、阿普唑仑等的气相色谱-质谱（GC-MS）定性、定量分析方法。并应用于临床药物中毒抢救指导。血浆样品经乙酸乙酯提取,采用GC-MS作为定性分析工具,将保留时间、特征离子和谱库检索相结合实行多指标定性。咖啡因为内标,采用选择离子模式定量。酰胺咪嗪、地西泮、艾司唑仑、阿普唑仑在0.05～20.0μg·ml-1范围内均呈良好线性关系,最低检出浓度为0.008μg·ml-1。苯巴比妥、硝西泮在0.1～40.0μg·ml-1范围内均呈良好线性关系,最低检出浓度为0.02μg·ml-1。回收率为55.78%～82.33%,日内RSD＜7.56%,日间RSD＜8.38%。本研究已完成32例患者的鉴别分析及定量分析,未出现阴性报告或假阳性报告,所有阳性报告均得到病史追溯证实。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 第一部分 绪论
• 1.1 研究背景
• 1.2 生物样本中有机磷色谱检测技术
• 1.2.1 样品前处理技术
• 1.2.1.1 液-液萃取法
• 1.2.1.2 固相萃取法
• 1.2.1.3 固相微萃取
• 1.2.1.4 超临界流体萃取
• 1.2.1.5 基质固相分散萃取
• 1.2.1.6 凝胶色谱
• 1.2.1.7 微波辅助萃取技术
• 1.2.2 色谱分析技术
• 1.2.2.1 薄层色谱法
• 1.2.2.2 气相色谱法
• 1.2.2.3 高效液相色谱法
• 1.2.2.4 色谱-质谱联用技术
• 1.3 生物样本中枢神经系统药物检测技术
• 1.3.1 免疫分析法
• 1.3.2 薄层色谱法
• 1.3.3 气相色谱法
• 1.3.4 高效液相色谱法
• 1.3.5 高效毛细管电泳
• 1.3.6 色谱-质谱联用技术
• 1.4 气-质联用技术在药物分析中的应用
• 1.4.1 中药及农产品的农药残留分析
• 1.4.2 中药成份与指纹图谱研究
• 1.4.3 药物代谢研究应用
• 第二部分 人血浆8种有机磷农药GS-MS检测方法的建立和应用
• 2.1 前言
• 2.2 仪器与试剂
• 2.2.1 仪器
• 2.2.2 试剂
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 GC-MS测定条件
• 2.3.2 标准溶液制备
• 2.3.3 样品处理
• 2.3.4 有机磷农药中毒定性研究
• 2.3.5 有机磷农药中毒定量方法
• 2.4 结果
• 2.4.1 方法专属性
• 2.4.2 重叠峰的定性与定量
• 2.4.3 标准曲线与线性范围
• 2.4.4 绝对回收率
• 2.4.5 方法的准确度与精密度
• 2.5 应用
• 2.6 讨论
• 2.6.1 样本处理方法的优化
• 2.6.2 程序升温条件优化
• 2.6.3 内标物的选定
• 2.6.4 检测离子选择与时间窗的设定
• 2.6.5 典型病例讨论
• 2.7 结论
• 第三部分 人血浆6种中枢神经系统药物GC-MS检测方法的建立和应用
• 3.1 前言
• 3.2 仪器与试剂
• 3.2.1 药品与试剂
• 3.2.2 仪器
• 3.3 方法与结果
• 3.3.1 气相色谱-质谱联用仪测定条件
• 3.3.1.1 气相色谱条件
• 3.3.1.2 质谱条件
• 3.3.2 定性方法
• 3.3.3 定量方法
• 3.3.4 标准溶液制备
• 3.3.5 样本处理
• 3.3.6 方法专属性
• 3.3.7 标准曲线绘制
• 3.3.8 绝对回收率
• 3.3.9 方法的准确度与精密度
• 3.3.10 样品稳定性
• 3.3.11 干扰性试验
• 3.4 应用
• 3.5 讨论
• 3.5.1 样品处理方法考察及优化
• 3.5.2 离子选择与时间窗优化
• 3.5.3 程序升温条件的选择
• 3.6 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 学位论文评阅及答辩情况表