论文摘要
妇科肿瘤的传统治疗方法是手术、放疗和化疗,这些方法在杀伤肿瘤细胞的同时,会对正常细胞产生不可避免的损伤,从而带来一些严重的并发症,有时不得不终止治疗。对于不能耐受手术、放化疗的患者,拒绝手术治疗的患者以及对化疗产生耐药的患者,迫切需要一种温和有效的治疗方法。光动力疗法（photodynamic therapy, PDT）治疗妇科肿瘤由此应运而生。不同肿瘤对PDT的敏感性不同。PDT致肿瘤细胞的凋亡率未达到100%,提示细胞中可能存在某些抵抗PDT的保护因素。研究表明,肿瘤细胞中的热休克蛋白170 （heat shock protein 70, HSP70）、血红素加氧酶-1 （heme oxygenase-1, HO-1）及缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α）可在氧化应激状态及某些药物作用下被激活,抑制细胞凋亡,从而起到保护肿瘤细胞的作用。本研究旨在体外细胞实验研究5-氨基酮戊酸（5-aminolevulinic acid,5-ALA）介导的光动力疗法（5-ALA-PDT）对人类卵巢癌SKOV3细胞系、宫颈癌Hela细胞系和子宫内膜癌KLE细胞系的杀伤作用,观察5-ALA-PDT对卵巢癌SKOV3细胞系HSP70、HO-1及HIF-1α表达的影响。第一部分5-氨基酮戊酸光动力疗法对妇科恶性肿瘤细胞的杀伤作用目的：探讨5-ALA-PDT对体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞、宫颈癌Hela细胞和子宫内膜癌KLE细胞的杀伤作用。方法：选择人卵巢癌SKOV3细胞系、宫颈癌Hela细胞系和子宫内膜癌KLE细胞系,分为仅加光敏剂而不照光的单纯光敏剂组（5-ALA组）、仅照光而不加光敏剂的单纯照光组（PDT组）、既加光敏剂又照光的5-ALA-PDT组和既不加光敏剂也不照光的正常对照组。在培养过程中对不同组别的3种细胞进行干预。采用CCK-8法检测5-ALA-PDT对3种细胞增殖的抑制作用。结果：5-ALA组细胞在0.1-1mM浓度时几乎无死亡,>2.0mM时细胞抑制率升高（SKOV3:2.0mM,2.83%; 4.0Mm,6.30%, Hela: 2.0mM,4.79%; 4.0Mm, 7.78%。KLE:2.0mM,8.90%; 4.0Mm,10.58%。）,分别与正常对照组相比较,均有显著性差异（P<0.05）。PDT组细胞与正常对照组相比,生长基本不受影响（P>0.05）。5-ALA-PDT组SKOV3、Hela和KLE细胞的抑制率均表现为随着5-ALA浓度及激光能量密度的升高而升高（P<0.05）；当光敏剂浓度达到2.0mM,激光能量密度达到5.0 J/cm2时,细胞生长抑制率上升不明显（P>0.05）,进入平台期。5-ALA-PDT后细胞抑制率随时间变化,24h达到高峰,以后逐渐下降。SKOV3的ICso值最高（P<0.05）。结论：5-ALA-PDT对SKOV3、Hela和KLE细胞有杀伤作用,该作用存在浓度饱和及光能量饱和现象；5-ALA-PDT后细胞抑制率具有时效性；3种细胞对5-ALA-PDT的敏感性不同,其中SKOV3最不敏感。第二部分5-氨基酮戊酸光动力疗法对SKOV3细胞HSP7O、HO-1及HIF-1α表达的影响目的：探讨5-ALA-PDT对人卵巢癌SKOV3细胞系HSP71、HO-1及HIF-1α表达的影响。方法：选择人卵巢癌SKOV3细胞系,分为既加光敏剂又照光的5-ALA-PDT组和既不加光敏剂又不照光的正常对照组。荧光Real-time PCR相对定量法检测卵巢癌细胞系SKOV3细胞正常对照组及5-ALA-PDT组干预后3h、12h、24h、48h、72h后HSP70、HO-1及HIF-1α的表达情况。结果：5-ALA-PDT组的3种细胞干预后,随着时间的推移（3h,12h,24h,48h, 72h）, HSP70的表达呈上升趋势,12h组与3h组相比差异无统计学意义（P>0.05）,24h组和正常对照组、3h组及12h组相比均有明显差异（P<0.05）; HO-1的表达呈上升趋势,各时间组相比均无显著差异（P>0.05）; HIF-1α的表达呈上升趋势,12h组与3h组相比差异无统计学意义（P>0.05）,24h组和正常对照组、3h组相比均有明显差异（P<0.05）。其中HSP70和HIF-1α的表达水平在5-ALA-PDT后24h显著上升（P<0.05）,24h后的变化趋势与第一部分中细胞抑制率随时间的变化趋势呈负相关。结论：HSP70、HO-1及HIF-1α可能参与人卵巢癌SKOV3细胞对5-ALA-PDT的抵抗作用并参与诱导肿瘤的PDT耐受。