论文摘要
本文的研究目的是应用自制的脊髓损伤模型打击装置----打击架制备大鼠脊髓损伤模型基础上，应用骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stemcells, MSCs）对其进行治疗，观察对脊髓损伤的保护和修复作用，并通过其对神经元细胞诱导凋亡的影响而初步探讨其作用机制。研究方法：根据MSCs的贴壁特性，体外分离纯化MSCs。通过镜下观察形态学变化、流式细胞仪检测细胞周期、MTT法检测其生长特性、流式细胞检测细胞表面标记鉴定所分离的MSCs；采用自制打击设备，应用改良的Allen动物模型方法制备大鼠脊髓损伤模型；根据改良Tarlov行为功能评价标准，观察MSCs对脊髓损伤模型大鼠的治疗作用；激光共聚焦显微镜观察体外DAPI标记的MSCs尾静脉注入后，向损伤组织趋化并定居；组织病理及免疫组织化学方法，观察MSCs治疗后，组织病理学变化，及对Bcl-2、Bax及Nogo表达的影响。结果：MSCs对脊髓损伤大鼠具有保护作用。MSCs在体外DAPI标记后，尾静脉注入脊髓损伤模型大鼠，激光共聚焦显微镜下观察发现，注入DAPI标记的MSCs 24小时，在脊髓损伤组织血管内出现荧光标记的MSCs；注入后第五天，损伤组织血管及其周围组织有标记的MSCs弥散；注入后第十天损伤组织内有荧光标记的MSCs广泛弥散。免疫组化结果显示：24小时正常对照组见低水平Nogo表达，细胞着色淡。模型组可见大量Nogo表达，且着色深。第七天正常对照组Nogo着色情况没有变化，模型组出现大量Nogo阳性细胞，MSCs治疗组Nogo阳性细胞数少于模型组。至第十五天，模型组Nogo阳性细胞数与第七天比减少，MSCs治疗组与模型组比，Nogo阳性细胞数明显减少且比第七天MSCs治疗组减少；24小时正常对照组可见Bcl-2少量表达，且细胞着色淡。手术及MSCs治疗组均有Bcl-2表达，细胞着色较深。第七天模型组Bcl-2持续高表达，MSCs治疗组Bcl-2阳性细胞数增多，阳性细胞数多于24小时相应剂量组。至术后第十五天，各组Bcl-2表达及着色情况依然表现出此现象。24小时正常对照组见低水平Bax表达，模型组及MSCs治疗组可见Bax表达。第七天模型组Bax持续高表达，MSCs治疗组Bax阳性细胞数减少，至术后第十五天，依然表现出此现象。结论：利用MSCs的贴壁特性成功地从骨髓中分离和纯化，且反复传代后能保持其原有的形态特点和分化能力；成功制备大鼠脊髓损伤模型；MSCs尾静脉注入后，可向损伤组织趋化并定居；MSCs尾静脉注入后，可促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复，对大鼠脊髓损伤具有修复作用；静脉移植MSCs能透过血脑屏障，所以由静脉途径移植MSCs治疗脊髓损伤可能是一条安全的、损伤小的、具有实用价值的细胞移植途径之一；体内实验表明MSCs可以通过抑制Nogo、Bax表达、上调Bcl-2表达，促进损伤脊髓的修复。本研究既丰富了MSCs组织修复的理论及实验数据，又为MSCs应用于临床提供数据和理论依据。
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标签：脊髓损伤论文; 骨髓间充质干细胞论文; 细胞移植论文; 凋亡论文; 大鼠论文;