论文摘要
大珠母贝（Pinctada maxima）和珠母贝（P. margaritifera）隶属于软体动物门（Mollusca）,双壳纲（Bivalvia）,珍珠贝目（Pterioida）,珍珠贝科（Pteriidae）,珠母贝属（Pinctada）。大珠母贝俗称白碟贝,主要分布于我国的海南省、雷州半岛及澳大利亚、东南亚沿岸海域,属热带、亚热带海洋的双壳贝类,是生产海水珍珠的最大贝类,所产珍珠为闻名遐迩的南洋珠,是最名贵的珠宝。珠母贝俗称黑蝶贝,分布于太平洋和印度洋的热带海域,我国海南岛、雷州半岛和台湾沿海亦有分布,该贝能育出世界上罕见的黑珍珠,也是目前唯一能批量生产黑珍珠的贝类。草莓海菊蛤（Spondylus fragum）隶属于软体动物门（Mollusca）,双壳纲（Bivalvia）,珍珠贝目（Pterioida）,海菊蛤科（Spondylidae）,海菊蛤属（Spondylus）,分布于菲律宾以及中国大陆的广东、海南等地,常见于浅海及潮间带低潮线附近的岩石及珊瑚礁上。该物种的模式产地在菲律宾。本研究:（一）、克隆了大珠母贝Prismalin-14cDNA（pmaxPrismalin-14）序列及其3’端基因组序列,并对其进行了序列结构分析和组织表达分析,对比了大珠母贝和合浦珠母贝（P. fucata）Prismalin-14蛋白的碳酸钙沉降抑制效果并探究了其原因;（二）、克隆了珠母贝组织蛋白酶D（Cathepsin D,CD）全长cDNA,命名为pmarCD,并对其进行了序列分析和组织表达分析;（三）、克隆了草莓海菊蛤α-淀粉酶（α-amylase）全长cDNA,命名为sfAMY,并对其进行了序列分析和组织表达分析。主要研究结果如下:1.利用已知大珠母贝EST文库扩增得到大珠母贝Prismalin-14 cDNA序列,该序列全长379bp,包括5’非编码区（UTR）24bp,3’非编码区（UTR）13bp,开放阅读框（ORF）339bp,编码由113个氨基酸组成的多肽,推测分子量约为12.7kDa,理论等电点为4.239,其N-端的16个氨基酸肽段为信号肽。2.选取编码大珠母贝pmaxPrismalin-14基因的ORF序列插入pET-32a质粒构建表达载体,通过IPTG诱导,亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白。碳酸钙沉淀抑制实验表明大珠母贝的pmaxPrismalin-14蛋白同样具有抑制碳酸钙沉淀的功能。3.组织特异性表达表明大珠母贝pmaxPrismalin-14基因在外套膜的表达远高于其它组织,对大珠母贝外套膜三个不同部位的荧光定量PCR表明,pmaxPrismalin-14基因在大珠母贝外套膜边缘表达最高,外套膜皮质部和外套膜中心表达较低。4.利用RT-PCR和RACE技术克隆了珠母贝pmarCD基因,该序列全长1840bp,5‘非编码区（UTR）长151bp,3‘非编码区（UTR）长516bp,开放阅读框（ORF）长1170bp,编码390个氨基酸,推测分子量为42.18kDa,理论等电点为6.354,存在转录终止序列AATAAA和polyA尾,其N-端的18个氨基酸肽段为信号肽序列。组织表达显示pmarCD基因在各个组织中均有表达,在性腺和肝胰脏中的有较高表达。5.利用RT-PCR和RACE技术克隆了草莓海菊蛤sfAMY基因,该序列全长1717bp,5‘非编码区长89bp,3‘非编码区长98bp,开放阅读框（ORF）长1527bp,编码509个氨基酸,推测分子量为56.98kDa,理论等电点为7.484,存在转录终止序列AATAAA和polyA尾巴。组织表达显示sfAMY基因在肝胰脏、性腺和肌肉中有表达,其中在肝胰脏中表达量最高。
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