Cofilin在人成骨肉瘤细胞迁移中的作用研究

论文摘要

本研究以体外培养的人成骨肉瘤细胞系-MG63等细胞为对象,利用RNAi沉默等分子生物学技术,观察Cofilin表达、激活以及Cofilin介导的信号通路对人成骨肉瘤细胞迁移的影响并详细探讨了其作用机制。通过检测人成骨肉瘤细胞中CXCR4基因蛋白表达发现,CXCR4在人成骨肉瘤细胞系MG63及U2OS细胞中高表达。提示SDF-1/ CXCR4生物学轴可能对调控骨肉瘤的生物学行为具有重要作用。进一步研究发现经SDF-1预处理的骨肉瘤细胞其迁移能力明显提高,同时SDF-1诱导了AKT磷酸化/激活以及Cofilin去磷酸化/激活。Wortmannin有效抑制了SDF-1诱导的骨肉瘤细胞迁移以及SDF-1/PI3’K/cofilin信号通路的激活;另外、抑癌基因PTEN瞬时转染骨肉瘤细胞后可导致AKT去磷酸化/失活,以及Cofilin磷酸化/失活。上述结果提示SDF-1/PI3’K/Cofilin信号通路对骨肉瘤细胞迁移起着关键的调控作用。本研究成功构建了靶向Cofilin基因的siRNA逆转录病毒表达载体,并将其稳定转染至MG63细胞系。细胞趋化实验结果显示沉默MG63细胞中Cofilin后,细胞运动、迁移能力明显降低。说明Cofilin是调控细胞的运动能力的重要因素。本研究为以Cofilin为靶点的肿瘤治疗学研究提供了新的理论基础。

论文目录

• 提要
• 英文缩写
• 第1章 文献综述
• 第2章 CXCR4 在人成骨肉瘤细胞中的表达及意义
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料与试剂
• 2.2.2 细胞培养
• 2.2.3 人成骨肉瘤U2OS 及MG63 细胞及成骨细胞HFOB 中CXCR4 蛋白表达比较
• 2.2.4 结果判定与统计学处理
• 2.3 实验结果
• 2.4 讨论
• 第3章 SDF-1/P13’K/COFILIN 信号通路调控骨肉瘤细胞迁移的机制
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 材料与试剂
• 3.2.2 细胞培养
• 3.2.3 SDF-1/P13’K 信号通路调控人成骨肉瘤细胞迁移的机制研究
• 3.2.4 结果判定与统计学处理
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 Wortmannin 对人成骨肉瘤细胞MG63 细胞基质外定向迁移的影响
• 3.3.2 Wortmannin 对人成骨肉瘤细胞MG63 表达P-AKT 水平的影响
• 3.3.3 Wortmannin 对人成骨肉瘤细胞MG63 表达的影响
• 3.3.4 SDF-1 对人成骨肉瘤细胞MG63 表达P-cofilin 及P-AKT 水平的影响
• 3.3.5 PTEN 对人成骨肉瘤细胞MG63 表达P-cofilin 及P-AKT 水平的影响
• 3.4 讨论
• 第4章 Cofilin 在人成骨肉瘤细胞侵袭中的作用研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料与方法
• 4.3 实验结果
• 4.4 讨论
• 第5章 结论
• 参考文献
• 附图
• 攻读博士期间发表的论文
• 致谢
• 中文摘要
• ABSTRACT