论文摘要
目的:胰胆管壶腹梗阻可引起胆汁淤积及胰液反流。胆汁淤积、胰液反流均可引起急性胆囊炎。胰液反流在急性胆囊炎的发病机制中作用,尚无文献报导。因此本试验的目的是通过采用家兔胆总管结扎并同时注入胰酶建立急性胆囊炎的动物模型,观察胆总管梗阻并胰酶注入组与单纯胆总管梗阻组在胆汁淀粉酶的活性、血清及胆囊组织中肿瘤坏死因子-a、胆囊组织巨噬细胞的数量,以及胆囊大体形态的不同,探讨胰液反流在急性胆囊炎中的作用机理;为临床因结石等因素造成胰胆管壶腹梗阻导致胰液反流引起的胆囊炎提供动物试验方面的依据,也为今后胰酶性胆囊炎的实验研究提供新思路,并加深对急性胆囊炎发病机制的认识。方法:选择健康家兔45只,体重2.0-3.0kg/只,雌雄不限,随机分为假手术组（SO组）,胆总管梗阻组（BDL组）,胆总管梗阻并胰酶注入组（M组）,每组15只,均在3天后处死,所有家兔手术前一天禁食,不禁水。胆总管梗阻并胰酶注入组模型制备:用3%的戊巴比妥钠（30-35mg/kg）耳缘静脉注射麻醉,在无菌操作下行上腹正中切口,钝性分离胆总管下段,先在胆总管近十二指肠开口处结扎,再以无菌儿童静脉留置针在结扎胆总管上方穿刺,后用丝线在穿刺点上方轻度结扎（以无胆汁漏出为度）,以1ml无菌注射器引出0.2ml胆汁,用微量枪抽取50U/ml的胰酶0.2ml注入1 ml的注射器中,以0.1ml/min注入胆总管,抽出穿刺管,将其上方丝线结扎。经检查无血液及胆汁漏出后关腹。胆总管梗阻组动物模型制备:同样条件下麻醉、开腹,钝性分离胆总管下段,后在胆总管近十二指肠开口处双重结扎。假手术组在麻醉及无菌开腹后仅钝性分离胆总管下段,不结扎。造模后放置于饲养笼中,观察家兔一般情况,3天后处死。在死亡前取血标本,离心,检测血清肿瘤坏死因子-a;抽取胆囊胆汁检测胆汁淀粉酶;摘除胆囊,并取胆囊底部（保证各组所取部位一致）,称重200mg,研磨成匀浆,离心后取上清液于-20℃保存,用于放射免疫法测肿瘤坏死因子-a,取其余适量胆囊组织置于10%甲醛中固定,制作石蜡切片,行病理检查,并采用免疫组织化学方法测量胆囊组织中的巨噬细胞的数量,所有数据结果均以均数±标准差表示,各组间均数比较采用单因素方差分析, P<0.05认为有统计学意义。结果:1大体形态:1.1胆总管梗阻并胰酶注入组肉眼观察:家兔胆囊体积明显增大,与周围组织器官粘连,胆囊底部表面有大小不一脓苔,色泽晦暗,部分粘膜坏死脱落,有小溃疡,胆囊胆汁呈现草绿色、墨绿色,有胆泥形成;显微镜观察:粘膜上皮重度脱落,甚至上皮消失,血管扩张充血,粘膜、固有膜、肌层、浆膜均可见高度水肿,大量炎症细胞浸润,肌层模糊不清,常伴有胆囊周围炎;1.2单纯梗阻组肉眼观察:胆囊体积增大,与周围脏器无粘连,外观无脓点,粘膜完整,壁水肿,色泽暗,表面无溃疡,胆囊胆汁呈现草绿色、墨绿色,无胆泥形成;显微镜观察:粘膜上皮轻度脱落,固有膜、肌层、浆膜都有水肿,并有血管扩张充血及少量炎症细胞浸润; 1.3假手术组肉眼观察:胆囊不大,与周围脏器无粘连,外观无脓点,粘膜完整,色泽稍暗,表面无溃疡,胆囊胆汁为草绿色,无胆泥形成;显微镜观察:粘膜上皮完好,各层无水肿、血管充血及炎细胞浸润。2各组家兔胆囊胆汁淀粉酶活性（U/dL）的变化情况假手术组胆囊胆汁淀粉酶活性为（59.60±8.77）、单纯胆总管梗阻组胆囊胆汁淀粉酶活性为（59.41±9.20）、胆总管梗阻并胰酶注入组胆囊胆汁淀粉酶活性为（166.08±10.00）;胆总管梗阻并胰酶注入组胆囊胆汁淀粉酶活性显著高于单纯胆总管梗阻组及假手术组（P<0.05）,而单纯胆总管梗阻组与假手术组无显著差异（P>0.05）。3各组家兔血清及胆囊组织中肿瘤坏死因子-a数值（×10pg/ml）的变化情况假手术组血清肿瘤坏死因子-a为（36.2±4.49）、单纯胆总管梗阻组血清肿瘤坏死因子-a为（53.0±6.41）、胆总管梗阻并胰酶注入组血清肿瘤坏死因子-a为（72.80±6.47）;胆总管梗阻并胰酶注入组血清肿瘤坏死因子-a数值显著高于单纯胆总管梗阻组及假手术组（P<0.05）,单纯胆总管梗阻组显著高于假手术组（P<0.05）。假手术组胆囊组织肿瘤坏死因子-a为（7.66±0.46）、单纯胆总管梗阻组胆囊组织肿瘤坏死因子-a为（26.30±2.54）、胆总管梗阻并胰酶注入组胆囊组织肿瘤坏死因子-a为（45.70±2.79）;胆总管梗阻并胰酶注入组胆囊组织肿瘤坏死因子-a数值显著高于单纯胆总管梗阻组及假手术组（P<0.05）,单纯胆总管梗阻组显著高于假手术组（P<0.05）。4各组家兔胆囊组织中巨噬细胞数量的变化情况假手术组胆囊组织巨噬细胞数量为（4.33±2.16）、单纯胆总管梗阻组胆囊组织巨噬细胞数量为（17.16±3.86）、胆总管梗阻并胰酶注入组胆囊组织巨噬细胞数量为（32.66±6.91）;胆总管梗阻并胰酶注入组胆囊组织巨噬细胞数量显著高于单纯胆总管梗阻组及假手术组（P<0.05）,单纯胆总管梗阻组显著高于假手术组（P<0.05）。DAB染色为深棕色的是巨噬细胞,假手术组家兔胆囊内粘膜间质及粘膜下组织可见少量巨噬细胞,单纯胆总管梗阻组、胆总管梗阻并胰酶注入组在粘膜间质及粘膜下组织巨噬细胞明显增多,且胆总管梗阻并胰酶注入组较单纯胆总管梗阻组明显增多。结论:1胰液反流加重胆道梗阻引起的急性胆囊炎,胰液反流时胆囊大体形态表明炎症更加明显。2胰液反流时胆囊组织巨噬细胞增多、血清和胆囊组织肿瘤坏死因子-α进一步升高,说明胰液反流加重胆道梗阻引起的急性胆囊炎。
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