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表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对小鼠卵母细胞体外成熟，受精及胚胎发育的影响

2020-12-02阅读(284)

表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对小鼠卵母细胞体外成熟，受精及胚胎发育的影响

论文摘要

在组织正常氧化代谢过程中会产生活性氧（reactive oxygen species, ROS）,它是生物体内产生的超氧阴离子（O2-）、过氧化氢（ H2O2）、羟自由基（OH-）、一氧化氮（NO-）等活性含氧化合物的总称。正常情况下ROS参与神经、内分泌、循环、免疫等系统的生理调节,在细胞稳态调节等细胞生命活动中作为第二信使参与多种因子细胞生物学效应的启动。ROS是一类新发现的信号分子,它们的化学性质活泼,容易引发氧化还原反应。在一些损伤因素的作用下,细胞内的氧化代谢物增加,或细胞中抗氧化保护机制不足时,使ROS产生堆积并对细胞产生毒性。在机体内环境中,氧自由基的破坏被体内的抗氧化剂阻断,如:过氧化物歧化酶（SOD）,过氧化氢酶,硒依赖性谷胱甘肽过氧化酶（SeGPX）以及脂溶性或水溶性维生素如:维生素C,维生素E和尿酸等。然而,卵母细胞或胚胎的体外培养时,比体内的抗氧化剂水平低,因此卵母细胞或胚胎离开供体后不能得到母体抗氧化剂的保护。这也是制约体外培养效果的一个因素。本研究通过在小鼠体外培养时添加抗氧化剂以提高体外培养的效果。EGCG是茶叶中的一种主要抗氧化物质,它是天然的抗氧化剂,且无毒副作用。本实验以小鼠为动物模型采用TCM-199和HTF两个基础培养体系,通过添加不同浓度的EGCG来研究其对小鼠卵母细胞体外成熟,受精及其后期胚胎发育的影响。并通过测定成熟卵母细胞内谷胱甘肽（GSH）浓度探讨EGCG的作用机理。主要的研究结果如下:1.G1/G2液相比于HTF和M16更适合小鼠胚胎的发育。2.在TCM-199体系中,培养COCs时EGCG的最佳添加量20μM,可以显著提高卵母细胞的成熟率、受精率和胚胎发育率。3.在TCM-199体系中,添加EGCG对裸卵（DO）作用不明显,不能提高卵母细胞的成熟率,对于受精率和胚胎发育率的影响不大,过量添加EGCG可以显著降低卵母细胞的成熟率,受精率和胚胎发育率。4.在HTF体系中,培养COCs时EGCG的最佳添加量20μM,可以显著提高卵母细胞的成熟率,以及后期受精率和胚胎发育率。5.在HTF体系中,添加EGCG对DO作用不明显,不能提高卵母细胞的成熟率,对于受精率和胚胎发育率的影响不大,过量添加EGCG可以显著降低卵母细胞的成熟率,受精率和胚胎发育率。6.添加20μM的EGCG可显著提高小鼠成熟卵母细胞（COCs）内GSH（谷胱甘肽）浓度,但是对DO细胞内GSH浓度影响不大。7.当EGCG添加量达到25μM时,可显著降低小鼠成熟卵母细胞（COCs）内GSH浓度。8.综合比较HTF体系的培养效果比TCM-199好。

论文目录

  • 摘要
  • 英文摘要
  • 符号说明
  • 文献综述
  • 1. 茶多酚的组成及作用基础
  • 1.1 茶多酚的组成
  • 1.2 茶多酚的作用基础
  • 2. EGCG 的生物学作用
  • 2.1 EGCG 与癌症治疗
  • 2.2 EGCG 与糖尿病治疗
  • 2.3 EGCG 的抗辐射作用
  • 2.4 EGCG 与细胞凋亡
  • 2.5 EGCG 可促进头发的生长
  • 2.6 防紫外线伤害和抗皮肤的光老化
  • 2.7 EGCG 与细胞培养
  • 3. 小鼠卵母细胞体外成熟技术研究进展
  • 4. 自由基与胚胎发育
  • 4.1 自由基的种类
  • 4.2 自由基与脂质过氧化反应
  • 4.3 过量自由基在体外培养时的作用研究
  • 4.4 卵母细胞成熟培养时添加抗氧化剂的培养效果
  • 5. 研究的目的意义
  • 材料方法
  • 1. 实验材料
  • 1.1 实验动物
  • 1.2 主要试剂
  • 1.3 主要仪器
  • 1.4 实验器材的准备
  • 1.4.1 玻璃器皿的准备
  • 1.4.2 手术器械的准备
  • 1.4.3 橡胶塞的处理
  • 1.5 操作液配方
  • 1.5.1 洗卵液配方（PBS）
  • 2. 实验方法
  • 2.1 实验分组
  • 2.2 实验内容
  • 2.3 实验方法Ⅰ（培养部分）
  • 2.4 实验方法Ⅱ
  • 3. 统计分析
  • 实验结果
  • 1. 在TCM-199（成熟培养）体系中三种发育液的发育效果比较
  • 2. 在TCM-199（成熟培养液）体系中不同浓度的EGCG 对卵母细胞成熟，受精及胚胎发育的影响
  • 2.1 不同浓度EGCG 对小鼠卵母细胞（COCs）成熟，受精及发育的影响
  • 2.2 在TCM-199 体系中不同浓度EGCG 对小鼠DO 成熟，受精及发育的影响
  • 2.3 用GR-谷胱甘肽酶还原法测定卵母细胞内GSH 浓度
  • 3. 在HTF 体系中培养结果及GSH 测定结果
  • 4. 两体系培养效果比较
  • 讨论
  • 1. 胚胎发育体系间的差异
  • 2. COCs 培养效果分析
  • 3. DO 培养效果分析
  • 4. 两种培养液培养效果分析
  • 结论
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 硕士期间发表论文

    • 相关论文文献

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