弹性蛋白酶与激肽释放酶联产工艺的研究

论文题目: 弹性蛋白酶与激肽释放酶联产工艺的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 微生物与生化药学

作者: 韩冰

导师: 张景海

关键词: 胰脏,弹性蛋白酶,激肽释放酶,纯化

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 胰脏是重要的消化器官，分泌各种用以消化食物的水解酶如弹性蛋白酶、激肽释放酶、淀粉酶及脂肪酶等，同时也分泌一些与代谢有关的重要激素如胰岛素、胰高血汤素等。这些酶或激素大多可作为重要的生化药物为人们所用，因而动物胰脏的综合利用具有很大的经济效益。我国主要从猪胰脏当中提取的生化药物是胰岛素，用完的残渣大都弃之不用，造成了资源上的浪费。本实验就是摸索出一套合适的工艺，从这些残渣当中回收弹性蛋白酶和激肽释放酶，为以后的工业化生产做好准备。弹性蛋白酶和激肽释放酶是以酶原的形式存在于胰脏当中，不具有任何活性，在纯化时必须将它们激活。本文首先考察了影响两酶激活的三个主要因素：pH值、温度和提取时间。最后确定在37℃下，用pH=B的缓冲液提取4小时，可将两酶完全激活，而为了提高收率，应连续进行两次抽提。此外，实验证明，Ca2+、Mg2+对弹性蛋白酶的激活有一定的抑制作用，对激肽释放酶的激活有较小程度的促进作用。在对弹性蛋白酶和激肽释放酶分离纯化时，采用的是离子交换法，第一步粗提使用的是国产离子交换剂AⅡ，经过此离子交换剂后，两酶被分开，弹性蛋白酶先被洗脱下，再经过离子交换剂CⅠ和疏水层析两次纯化后，纯度达到电泳纯，比活为61.05IU／mg，活性收率为69.03％，纯化倍数为10.94倍；激肽释放酶先是被离子交换剂AⅡ所吸附，被洗脱下来后，再经离子交换剂CⅡ和疏水层析两次纯化后，纯度达到电泳纯，比活为71.63IU／mg，活性收率为68.12％，纯化倍数为11.70倍。最后对两酶的部分性质进行了考察，弹性蛋白酶的分子量约为26.0kDa，紫外下的最大吸收波长是276nm；激肽释放酶的分子量约为27.0kDa，紫外下的最大吸收波长是280nm；两酶在37℃下，pH=5.5和6.5时比较稳定，在pH=3.5和8.5时很容易失活。

论文目录:

中文摘要

ABSTRACT

第一章前言

1 生化药物概况

2 弹性蛋白酶的有关研究

2.1 化学组成和性质

2.2 活性测定的方法

2.3 药理研究与临床应用

2.4.弹性蛋白酶的生产

3 激肽释放酶的有关研究

3.1 化学组成和性质

3.2 活性测定的方法

3.3 药理研究与临床应用

3.4 激肽释放酶的生产

4 胰脏的综合利用

5 立题依据及目的

第二章弹性蛋白酶与激肽释放酶联产工艺的研究

第一节弹性蛋白酶与激肽释放酶提取条件的考察

1 实验材料

2 实验方法

2.1 刚果红-弹性蛋白的制备

2.2 弹性蛋白酶活性测定方法

2.3 激肽释放酶活性测定方法

3 实验结果

3.1 弹性蛋白酶和激肽释放酶提取条件的考察

3.1.1 提取时pH值的考察

3.1.2 提取温度和时间的考察

3.1.3 提取次数的考察

3.1.4 Ca~(2+)、Mg~(2+)对弹性蛋白酶和激肽释放酶激活水平的影响

4 讨论

5 小结

第二节弹性蛋白酶与激肽释放酶的分离纯化

1.实验材料

2.实验方法

2.1 离子交换剂的处理

2.2 三氯乙酸沉淀蛋白

2.3 不连续-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)

2.4 Folin-酚法测定蛋白质含量

2.5 激肽释放酶中杂蛋白的检测

3.实验结果

3.1 离子交换剂的选择

3.2 弹性蛋白酶的分离纯化

3.2.1 离子交换剂CⅠ层析

3.2.2 疏水层析

3.3 激肽释放酶的分离纯化

3.3.1 离子交换剂CⅡ层析

3.3.2 疏水层析

3.4 弹性蛋白酶与激肽释放酶的纯化收率

3.5 激肽释放酶中杂蛋白的检测

3.6 自制品与市售品纯度及活性的比较

4 讨论

5 小结

第三节弹性蛋白酶与激肽释放酶的部分性质考察

1.实验材料

2.实验方法与结果

2.1 弹性蛋白酶与激肽释放酶的分子量测定

2.2 弹性蛋白酶在不同pH条件下稳定性的考察

2.3 激肽释放酶在不同pH条件下稳定性的考察

2.4 弹性蛋白酶与激肽释放酶的紫外吸收光谱

3 小结

结论

参考文献

致谢

发布时间: 2006-12-14

弹性蛋白酶与激肽释放酶联产工艺的研究

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