人胚胎肌肉组织来源的随机恶性转化细胞系的生物学特性

论文摘要

背景与目的非整倍体是癌细胞的最大遗传特征,非整倍体是指细胞核内染色体数目出现异常。100多年前就有人提出非整倍体是癌症的起因假说,近来越来越多的研究证实这种假说成立的可能性。但非整倍体作为独立因素能否导致肿瘤的发生,目前还没有确切的结论。本实验用人胚胎肌肉细胞进行培养,通过聚乙二醇融合肌肉细胞,以期获得非整倍体细胞,由于聚乙二醇是非致突变物质,在融合过程中不会有基因突变的产生,排除了基因突变的作用,通过此方法获得非整倍体细胞,进一步分析产生的非整倍体细胞能否形成肿瘤,从而对肿瘤产生的诱因-非整倍体学说进行深入研究。材料和方法用人胚胎肌肉细胞进行培养,50%聚乙二醇进行细胞融合,观察能否产生非整倍体细胞;利用3-甲基胆蒽（MCA）和秋水仙素（colcemid）联合处理人胚胎肌肉细胞,产生的非整倍体细胞作为阳性对照;未进行任何处理的肌肉细胞作为阴性对照,通过染色体分析和流式细胞仪分析检测非整倍体细胞。对非整倍体细胞进行长期培养,观察细胞能否恶性转化形成肿瘤。结果通过流式细胞仪分析发现,通过细胞融合及MCA和秋水仙素（colcemid）处理均产生非整倍体细胞,染色体分析发现这些细胞染色体数目是异常的,产生的非整倍体细胞以亚二倍体为主,少量细胞为超二倍体;而且部分非整倍体细胞短期培养可以增殖,其中一次融合永生化,但均未发生恶变。结论聚乙二醇对人胚胎肌肉正常二倍体细胞融合,能够产生非整倍体细胞。长期培养,未发现细胞的恶性转化。背景和目的本实验室通过人胚胎肌肉细胞的培养,获得自发恶性转化为肉瘤细胞系,分别命名MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5。本实验对这种自发恶性转化细胞系的染色体变化进行研究,揭示这种肉瘤细胞系的染色体变化特点。材料和方法染色体分析转化肉瘤细胞系MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5染色体数目和结构的变化特点。通过流式细胞仪分析进行染色体倍体研究。结果肉瘤细胞系几乎所有的细胞核型都存在染色体数目和结构的异常,染色体数目大多在46条以上,结构异常包括环形染色体、线形染色体、双着丝粒染色体和广泛的易位。流式细胞仪分析肉瘤细胞系全部是非整倍体。结论MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5肉瘤细胞系是非整倍体细胞,染色体的数目和结构存在大范围的异常。目的观察苦参碱（matrine）对体外培养的人肉瘤细胞系MS0812细胞的增殖和诱导调亡作用。方法苦参碱处理人肉瘤细胞系MS0812后,应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱和不同作用时间对MS0812细胞的增殖作用的影响,DNA凝胶电泳、TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果苦参碱对MS0812细胞增殖具有抑制作用,其增殖抑制作用随作用时间延长及药物浓度升高更加明显,具有时间和剂量依赖性。DNA凝胶电泳观察到发生调亡时出现的阶梯状条带;通过TUNEL染色可以发现调亡阳性细胞;流式细胞仪检测可见经苦参碱处理后G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降及低G1期细胞出现,并形成亚二倍体峰（凋亡峰）。结论苦参碱在体外对肿瘤细胞系MS0812的生长具有抑制和诱导调亡作用。

论文目录

• 前言
• 第一部分 聚乙二醇介导的细胞融合导致非整倍体细胞的产生
• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩写表
• 前言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 总结
• 参考文献
• 第二部分 人类胚胎肌肉组织来源的随机恶性转化细胞系染色体分析
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 总结
• 参考文献
• 第三部分 苦参碱抑制人突变肉瘤细胞系MSO812增殖和诱导凋亡的体外实验研究
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 总结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 小结
• 致谢
• 发表论文
• 个人简历