骨骼肌卫星细胞的体外培养和心肌匀浆对卫星细胞诱导分化的影响

论文摘要

【目的】骨骼肌卫星细胞移植到受损心肌中后,在新的环境下可能受到环境诱导作用,可能与心肌细胞形成连接,表达心肌特异性蛋白,在新的环境下生物学性状出现变化。由于体内环境的复杂性和研究卫星细胞在不受电机械刺激下的生长和分化情况,我们设计了体外心肌匀浆微环境下卫星细胞的体外培养,来观察卫星细胞生物学性状的变化。【方法】应用胰蛋白酶和胶原酶Ⅰ消化法获取骨骼肌卫星细胞,以Percoll非连续密度梯度离心法纯化卫星细胞。以一抗α-肌动蛋白（α-Actin）单克隆抗体,应用SABC免疫组化染色法鉴定卫星细胞。应用原代培养的第3天加入心肌匀浆液持续作用1周,1周后转换为完全培养基继续培养3周。观察卫星细胞形态变化和分化特性,3周后应用免疫组化的方法检测心肌特异性肌钙蛋白-T（cTn-T）的表达。【结果】本实验方法可以获取纯度＞90%的卫星细胞,可以为细胞移植获取大量纯度高的种子细胞。卫星细胞多呈梭形或者纺锤形,培养4至5天就可以看到细胞互相融合形成肌管。卫星细胞抗a-Actin染色,阳性细胞浆中有棕色颗粒。原代培养的卫星细胞经过诱导培养后表现出不适应,早期、大量的死亡。28天后应用SABC免疫组化的方法检测,结果示卫星细胞不表达心肌特异性cTn-T蛋白。【结论】1.卫星细胞在心肌匀浆微环境下表现出不适应,早期大量、死亡。诱导培养后不表达心肌特异性cTnT蛋白2.骨骼肌卫星细胞仍然是一种有前景的种子细胞,但是植入前需要经过预处理或者转染一些有用的目的基因,以增加移植细胞的生存率,增加受损心肌的血管生成,增加与心肌细胞的连接。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一章 实验材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 实验动物
• 1.1.2 主要试剂及来源
• 1.1.3 主要仪器及来源
• 1.1.4 主要溶液配置
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 骨骼肌卫星细胞分离及原代培养
• 1.2.2 绘制骨骼肌卫星细胞的生长曲线
• 1.2.3 骨骼肌卫星细胞的分化及鉴定
• 1.2.4 心肌匀浆上清液制备
• 1.2.5 骨骼肌卫星细胞在心肌匀浆下诱导分化
• 1.2.6 免疫组化鉴定
• 第二章 实验结果
• 2.1 骨骼肌卫星细胞形态和生长
• 2.2 免疫组织化学染色
• 2.3 骨骼肌卫星细胞在心肌匀浆中的诱导培养
• 第三章 讨论
• 3.1 取材
• 3.2 分离
• 3.3 纯化
• 3.4 促细胞贴壁底物和培养基的选择
• 3.5 骨骼肌卫星细胞的鉴定
• 3.6 骨骼肌卫星细胞在心肌匀浆中的诱导培养
• 3.7 骨骼肌卫星细胞治疗心肌梗死的研究方向
• 3.8 细胞移植治疗心肌梗死的研究前景
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 附录
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢