论文摘要
背景：系统性硬化（Systemic Sclerosis, SSc）是一种病因不明的结缔组织病（connective tissue disease, CTD）,可累及多个系统。其中,皮肤及肺以纤维化为主要表现,肺部特征性表现为肺成纤维细胞增生及细胞外基质（extracellular matrix, ECM）沉积。SSc患者肺间质纤维化常呈进行性发展,目前缺乏有效的治疗手段,常常成为影响患者预后的重要因素。组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases, HDACs） SIRT1可能通过转化生长因子-β （transforming growth factor-p, TGF-p）介导的信号通路参与SSc纤维化病变的发病过程。本实验旨在寻找SSc抗纤维化治疗新的靶点和方向。目的：在前期研究的基础上,探讨系统性硬化动物模型的建立及SIRT1的激动剂白藜芦醇（resveratrol, Res）对其肺及皮肤病变的作用。方法：首先,应用博来霉素（bleomycin, BLM）连续皮下注射的方法,建立Balb/c小鼠SSc模型,观察其肺部及皮肤病变情况及去乙酰化酶SIRT1的表达情况。然后,应用SIRT1的激活剂Res饲喂进行干预,观察病变改善情况及SIRT1的表达。观察的主要指标有：肺组织及注射处皮肤苏木素-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色观察皮肤及肺组织病理改变；应用免疫组化方法检测皮肤及肺组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）含量；应用荧光定量PCR （RealTime-PCR）法检测肺组织中SIRT1、Ⅲ型前胶原及a-SMA的mRNA表达；应用羟脯氨酸（hydroxyprolein, HYP）试剂盒检测皮肤及肺组织HYP含量。结果：BLM连续皮下注射4周后,小鼠HE染色可见皮肤增厚,肺泡间隔增厚、炎性浸润和部分区域纤维化表现,肺及皮肤a-SMA阳性细胞较对照组显著增多（P<0.05）,肺部Ⅲ型前胶原表达上升（P<0.05）。停止给药后3周肺部病变仍较明显。SSc模型组小鼠SIRT1表达下降（P<0.05）。应用Res干预后,皮肤及肺部病理改变有所减轻,皮肤及肺部a-SMA阳性细胞减少（部分剂量组P<0.05）,肺组织中SIRT1表达较模型组无显著差异。结论：BLM连续皮下注射可成功诱导SSc小鼠模型,该模型可观察到明显肺部病变,且肺组织SIRT1基因的表达下降。应用Res干预后,皮肤及肺部病变有所减轻。