驱蚊草与罗勒的组织培养和细胞学融合研究

论文摘要

驱蚊草，芳香类天竺葵多年生草本植物，它是非洲的天竺葵和中国的香茅草的细胞融合的产物。驱蚊草可以通过叶片散发香茅醛，具有良好的驱蚊效果，同时具有提神醒脑、抗菌、抗忧郁、缓解压力的作用，被誉为“神草”。但由于驱蚊草是体细胞杂合产物，所以种子不育，而用常规扦插的方法繁殖率又很低，因此采用离体快速繁殖技术才是实际可行的技术手段。罗勒不仅是重要的调香原料，而且还具有驱虫、驱蝇功效。生物技术的发展使得通过驱蚊草、罗勒原生质体融合培育驱蚊驱蝇新品种成为可能。本实验建立了完善的驱蚊草、罗勒组培体系，并对驱蚊草、罗勒原生质体融合的条件进行了初步分析，主要结果如下：1．以MS为基本培养基，运用正交设计方法，利用植物组织、细胞培养技术，成功地建立了驱蚊草和罗勒的组织培养快繁技术体系。驱蚊草的组织培养体系的最佳条件：不定芽诱导的最适培养基为MS+6-BA0.2mg·L-1+NAA0.3mg·L-1；生根培养基为1／2MS+NAA0.4mg·L-1；最适愈伤组织诱导培养基为MS+2，4-D0.5mg·L-1+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.3mg·L-1。罗勒的最佳条件：壮苗的最适培养基为MS+6-BA0.2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+KT0.3mg·L-1；生根培养基为1／2MS；愈伤组织诱导最适培养基为MS+2，4-D0.5mg·L-1+6-BA3.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1。2．本研究对酶解最佳条件进行研究，得出分离驱蚊草原生质体酶解条件以CPW-13进行质壁分离1h，2.0％纤维素酶和0.4％果胶酶，0.5M甘露醇为渗透压，27℃黑暗下80r／m酶解处理8h为好，产量可达1.67×106个／g，原生质体活力为87.4％；分离罗勒原生质体酶解条件以CPW-13进行质壁分离1h，1.6％纤维素酶和0.4％果胶酶，0.5M甘露醇为渗透压为好，27℃黑暗下80r／m酶解处理8h，产量可达2.14×106个／g，原生质体活力为67.8％。3．通过PEG诱导原生质体融合的研究，得出驱蚊草和罗勒的最佳融合条件为：PEG6000的浓度为30％、Ca2+浓度为0.3 mg·L-1，pH值为10.5时融合百分率最高，可达11.2％。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 驱蚊草
• 1.1.1 驱蚊草概述
• 1.1.2 驱蚊草中的植物精油
• 1.1.3 驱蚊效果
• 1.1.4 快速繁殖与应用
• 1.2 罗勒
• 1.2.1 罗勒概述
• 1.2.2 罗勒的栽培
• 1.2.3 罗勒的研究开发和利用
• 1.3 植物细胞融合技术
• 1.4 植物原生质体的制备和纯化
• 1.4.1 植物起始材料的选择
• 1.4.2 植物基因型的选择
• 1.4.3 合适培养基的选择
• 1.4.4 培养方法和密度
• 1.4.5 植物原生质体的预处理
• 1.4.6 植物原生质体的酶解
• 1.4.7 植物原生质体的活力鉴定
• 1.5 植物原生质体融合技术
• 2+、高pH-PEG诱导体细胞融合法'>1.5.1 高Ca²⁺、高pH-PEG诱导体细胞融合法
• 1.5.2 植物原生质体电融合诱导法
• 1.5.3 植物原生质体激光诱导融合技术
• 1.6 杂种细胞的筛选与培养
• 1.6.1 体细胞杂交
• 1.6.2 配子-体细胞杂交
• 1.7 植株再生和鉴定
• 1.7.1 植物原生质体的植株再生
• 1.7.2 杂种细胞的鉴定
• 1.8 研究目的及意义
• 第二章 驱蚊草组织培养及离体再生体系的建立
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 不同激素配比对不定芽诱导的影响
• 2.3.2 不同培养基配方对驱蚊草生根的影响
• 2.3.3 不同激素配比对驱蚊草愈伤组织诱导的影响
• 第三章 罗勒组织培养及离体再生体系的建立
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 不同激素配比对罗勒壮苗的影响
• 3.3.2 不同培养基配方对罗勒生根诱导的影响
• 3.3.3 不同激素配比对罗勒愈伤组织诱导的影响
• 第四章 驱蚊草与罗勒的细胞融合研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 材料
• 4.2.2 方法
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 不同材料选择对原生质体分离的影响
• 4.3.2 不同苗龄选择对原生质体分离的影响
• 4.3.3 质壁分离时间选择对原生质体分离的影响
• 4.3.4 不同酶液组成和酶解时间选择对原生质体分离的影响
• 4.3.5 PEG浓度选择对原生质体融合的影响
• 2+浓度和pH值组合选择对原生质体融合的影响'>4.3.6 Ca²⁺浓度和pH值组合选择对原生质体融合的影响
• 第五章 结论与讨论
• 5.1 不同培养基配方对驱蚊草和罗勒组织培养有显著影响
• 5.2 2,4-D对愈伤组织诱导起关键作用
• 5.3 影响原生质体产量和活力的因素
• 2+浓度、pH值直接影响原生质体融合率'>5.4 PEG浓度和Ca²⁺浓度、pH值直接影响原生质体融合率
• 5.5 展望
• 参考文献
• 缩略词表
• 附录
• 致谢