导读:本文包含了细胞质力蛋白中间链论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:DYNC1I1,胃癌,IL-6,NF-κB
细胞质力蛋白中间链论文文献综述
宫丽宝[1]（2019）在《细胞质动力蛋白中间链1（DYNC1I1）促进胃癌细胞增殖迁移及机制研究》一文中研究指出目的:正常细胞的功能维持依赖于细胞内精细的物质运输体系,相较于正常细胞,肿瘤细胞内物质代谢、信号传导更活跃。细胞质动力蛋白是细胞内物质运输的一个重要载体,是由多个亚基组成的分子量较大的复合物,其主要功能为沿着微管向微管负端进行长距离细胞内物质运输,以及有丝分裂过程中核膜破裂、纺锤体组装、染色体运动等。既往研究显示其功能异常可导致肿瘤发生,并且在肿瘤发展过程中,细胞质动力蛋白可以与某些促癌蛋白协同作用促进肿瘤增殖、转移。DYNC1I1是细胞质动力蛋白的重要货物结合亚基,其在肿瘤中的作用存在争议。早期研究发现其在肝细胞癌中表达增加,但最近研究显示在脑胶质瘤中其表达下调,抑制肿瘤进展,高表达DYNC1I1脑胶质瘤患者预后较好。目前对DYNC1I1在肿瘤中的作用研究有限,在胃癌中尚无报道。我们前期在线数据分析表明DYNC1I1是胃癌预后不良因素,但在胃癌中的作用及机制并不明确。在这里,我们主要研究DYNC1I1在胃癌中的作用及其潜在机制。材料与方法:1.利用MTT法测定细胞活性。2.利用ELISA检测细胞上清液中IL-6的浓度。3.利用eBioscience~(TM)Annexin V-FITC凋亡试剂盒检测细胞凋亡。4.利用ACTIVE MOTIFTM试剂盒提取细胞核蛋白。5.利用Western Blot检测蛋白表达。6.利用免疫荧光技术检测P65,P-P65等蛋白的表达及细胞内分布情况。7.利用Lipofectamine 2000试剂进行瞬时siRNA或质粒转染,下调目标蛋白的表达。8.动物实验建立裸鼠胃癌皮下成瘤及尾静脉肺转移模型,研究沉默DYNC1I1表达对胃癌皮下成瘤及肺转移病灶的抑制作用。9.利用RT-qPCR检测DYNC1I1、IL-6、TNPO2等基因mRNA的表达情况。10.Affymetrix sanner 3000芯片检测细胞基因表达谱水平。11.利用集落形成实验检测沉默DYNC1I1后对胃癌细胞增殖的长期抑制作用。12.利用碘化丙啶(Propidium Iodide PI)单染流式细胞术检测细胞周期。13.利用免疫共沉淀法分析蛋白复合物的形成。14.采用Gene Expression Omnibus(GEO)在线数据库分析DYNC1I1表达与胃癌病理学参数相关性,DYNC1I1表达与胃癌预后的关系。15.统计学处理:每次实验结果重复3次,数据以均值±标准差(±S)表示。采用SPSS 17.0统计分析软件进行统计学分析。各组间比较采用t检验,P<0.05具有统计学意义。结果:1、高DYNC1I1表达的胃癌患者预后不良。在NCBI的GEO数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo)下载胃癌数据集GSE62254用于研究DYNC1I1临床价值。根据DYNC1I1基因表达将数据分为高DYNC1I1表达和低DYNC1I1表达组。卡方检验用于确定DYNC1I1表达与胃癌临床病理特征之间的关系。分析显示DYNC1I1表达与胃癌侵袭深度,淋巴结状态和临床(TNM)分期相关。单因素及多因素COX分析显示DYNC1I1是胃癌的独立预后危险因素。根据DYNC1I1表达水平分析了胃癌患者的总生存期(OS),发现高DYNC1I1表达的胃癌患者具有较短的生存期(P<0.001)。多因素Cox分析显示,DYNC1I1是胃癌的独立预后危险因素(P<0.05)。这些数据表明高DYNC1I1表达胃癌分期较晚,并且高DYNC1I1表达胃癌患者预后不良。2、DYNC1I1在体外促进胃癌细胞的增殖和迁移。Western blot测定了6种胃癌细胞系及正常胃细胞GES-1中DYNC1I1蛋白的表达水平。与正常胃细胞GES-1相比,在胃癌细胞中观察到更高的表达。本研究选择表达较高的胃癌细胞系HGC-27、SGC-7901。MTT和集落形成实验评估DYNC1I1对细胞增殖的影响。与对照组相比,沉默DYNC1I1后抑制胃癌细胞增殖。集落实验证明沉默DYNC1I1后对胃癌细胞的长期增殖抑制更明显。Transwell结果显示沉默DYNC1I1后明显抑制胃癌细胞迁移,与同期增殖相比迁移抑制率明显增大,DYNC1I1抑制胃癌细胞迁移并不是由于抑制增殖所致。这些体外实验证明,DYNC1I1的敲低抑制了胃癌细胞的增殖和迁移。3、DYNC1I1促进裸鼠体内胃癌增殖和转移。将转染有沉默DYNC1I1慢病毒(KD-DYNC1I1)的SGC-7901细胞及转染无用序列(NC-DYNC1I1)的SGC-7901细胞注射入裸鼠皮下,沉默DYNC1I1组比对照产生体积更小的皮下肿瘤。免疫组化显示沉默DYNC1I1组中Ki-67(增殖标记物)的水平显着降低。将同样处理的SGC-7901细胞尾静脉注射到小鼠体内来检测DYNC1I1在体内肿瘤转移中的作用。在尾静脉注射肿瘤细胞后9周处死小鼠检查肺是否存在转移结节及转移结节数目。与对照组相比,注射SGC-7901 KD-DYNC1I1细胞的小鼠肺转移结节明显减少。免疫组织化学染色显示,与对照组肿瘤相比,沉默DYNC1I1组肿瘤中DYNC1I1和Ki-67的表达水平显着降低。这些数据表明沉默DYNC1I1后可以抑制体内肿瘤的增殖和转移。4、DYNC1I1上调IL-6发挥功能。在cBioPortal for Cancer Genomics网站下载胃腺癌数据库。筛选与DYNC1I1表达正相关并且Spearman系数大于或等于0.3的基因。然后使用DAVID网站进行通路分析。GO分析显示变化倍数最大的前5个并且P<0.05的通路包括IL-6-Jak-STAT signaling pathway,与细胞增殖和迁移显着相关的通路。应用HGC-27细胞系在沉默DYNC1I1后进行Affymetrix sanner表达谱芯片检测。对下调的基因进行GO分析,排名前5的通路包括“Negative regulation of interleukin-6 secretion”。表明IL-6可能在DYNC1I1介导的胃癌细胞增殖和迁移中起关键作用。ELISA测定结果显示沉默DYNC1I1后上清液中的IL-6蛋白水平明显降低。蛋白质印迹显示,在沉默DYNC1I1表达后,磷酸化STAT3(其是经典的IL-6下游靶标)也显着下调,但STAT3变化并不明显。这些结果表明,DYNC1I1可能通过调节IL-6的水平来调节胃癌细胞的生物学行为,并且IL-6-Jak-STAT途径可能参与DYNC1I1对胃癌细胞增殖和迁移的调节。5、DYNC1I1通过上调IL-6促进胃癌细胞的增殖和迁移。在对照组细胞中添加IL-6中和抗体显着抑制胃癌细胞增殖(~60%)。相反,在沉默DYNC1I1组细胞中添加重组人IL-6因子逆转了由沉默DYNC1I1导致的细胞增殖抑制。在沉默DYNC1I1后加入重组人IL-6细胞迁移能力上调。免疫组织化学染色显示在小鼠皮下肿瘤和肺转移结节中沉默DYNC1I1组的小鼠肿瘤组织IL-6表达下调。总之,这些结果表明,DYNC1I1通过上调IL-6来促进胃癌细胞的增殖和迁移。6、DYNC1I1通过促进NF-κB核转运来上调IL-6的表达。RT-qPCR结果显示沉默DYNC1I1后IL-6 mRNA水平显着降低。使用GeneCard网站(GeneCards-Human Genes|Gene Database|Gene Search)预测IL-6转录因子,排在首位的转录因子是NF-κB。核浆分离结果显示沉默DYNC1I1导致p65转位至细胞核中的量减少,无论是本底及其磷酸化水平。免疫荧光实验进一步证实p65在胃癌细胞内的分布。免疫共沉淀显示P65与DYNC1I1结合。基于这些结果,得到结论DYNC1I1可能通过促进P65核转位来上调IL-6转录。另外还检测了沉默DYNC1I1后DYNC1I1本身在胃癌细胞中的分布,DYNC1I1在细胞核中的表达没有显着变化,但其在细胞质中的表达下调,这说明沉默DYNC1I1后可能影响其在胞浆中的作用,因为DYNC1I1在细胞质中的作用主要是将货物长距离向微管负端运输,推测是否在沉默DYNC1I1后主要影响其作为运输载体的功能。总之,这些结果显示DYNC1I1通过促进胃癌细胞中的p65核转位来上调IL-6表达水平。7、DYNC1I1上调胃癌细胞TNPO2表达。为探讨DYNC1I1在胃癌中促进细胞增殖转移的具体机制,用Affymetrix sanner表达谱芯片检测在HGC-27细胞中沉默DYNC1I1后mRNA表达的差异。结果发现与对照组相比,沉默DYNC1I1后下调最明显的前10位基因中TNPO2表达明显下调,达29.55倍。接着在SGC-7901、HGC-27细胞中沉默DYNC1I1后分别应用RT-PCR,Western blot检测TNPO2 mRNA和蛋白水平变化,沉默DYNC1I1后无论在mRNA水平还是蛋白水平TNPO2均下调,且均有统计学意义。8、高TNPO2表达的胃癌患者预后不良。为了阐明TNPO2在胃癌中的作用,在GEPIA网站检测了TNPO2在胃癌及癌旁表达水平,胃癌中的表达明显高于癌旁。KM-Plotter数据库对不同TNPO2表达水平的胃癌患者进行生存分析,结果发现高表达TNPO2的胃癌患者预后较差。这些结果说明高TNPO2表达的胃癌患者预后不良。9、TNPO2促进胃癌细胞增殖。为了评估TNPO2在胃癌细胞中的生物学功能,应用siRNA瞬时沉默TNPO2表达,MTT检测显示沉默TNPO2后胃癌细胞增殖能力明显下调。流式细胞术检测沉默TNPO2后细胞周期水平变化。实验结果显示与对照组相比在沉默TNPO2 48小时后细胞周期阻滞在G1期。10、DYNC1I1下调转录因子SP1下调TNPO2表达。首先通过PROMO网站预测TNPO2转录因子。同时在genecard网站预测TNPO2转录因子,排在首位的为SP1,其包含在PROMO网站预测的结果中。推测SP1在DYNC1I1调控TNPO2表达中起重要作用。应用RT-qPCR及Western Blot检测在沉默DYNC1I1后SP1 mRNA及蛋白水平变化,在沉默DYNC1I1后SP1 mRNA和蛋白水平均下调。沉默SP1后检测TNPO2蛋白水平变化,结果显示沉默SP1后胃癌细胞中的TNPO2在蛋白水平下调。这些结果证明在胃癌细胞中DYNC1I1通过调控TNPO2转录因子SP1的表达从而调控TNPO2表达。结论:1.高DYNC1I1表达胃癌患者预后不良,DYNC1I1是胃癌的独立预后不良因素;2、DYNC1I1通过促进P65核转位上调IL-6表达从而促进胃癌细胞在体内体外增殖、转移;3、DYNC1I1通过上调转录因子SP1上调TNPO2表达;4、TNPO2促进胃癌细胞增殖。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-03-01）
金卫国[2]（2004）在《百合花粉管中类细胞质力蛋白中间链的研究》一文中研究指出细胞质力蛋白在动物和低等植物细胞中不仅参与细胞内细胞器和靶分子等的运输，还参与高尔基体等细胞器的组装和定位。近来的研究表明在高等植物细胞中存在细胞质力蛋白的重链和轻链，但力蛋白中间链在高等植物细胞中还未见报道。 通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹发现，抗鸡脑细胞质力蛋白中间链单克隆抗体在百合花粉及花粉管丙酮粉中67 kDa处有免疫交叉反应。 免疫荧光标记及激光共聚焦扫描显微镜观察发现，类细胞质力蛋白中间链在百合花粉管中存在于颗粒状细胞器上；免疫荧光双标及激光共聚焦扫描显微镜观察发现，百合花粉管中类细胞质力蛋白中间链和微管存在部分共分布。对分离纯化的百合花粉及花粉管中高尔基体组分进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹发现，抗鸡脑细胞质力蛋白中间链单克隆抗体在67 kDa处有较强的免疫交叉反应；进而通过免疫金标结合电子显微镜观察发现，大多数类细胞质力蛋白中间链存在于高尔基体附近的囊泡膜上；统计结果表明，类细胞质力蛋白中间链在顺面和反面高尔基体附近囊泡膜上的分布机率大致相等。 用BFA处理百合花粉管后，通过免疫荧光标记及激光共聚焦扫描显微镜观察发现类细胞质力蛋白中间链对BFA不敏感；同样的处理发现类红膜肽对BFA敏感。 以上的结果表明类细胞质力蛋白中间链存在于百合花粉及花粉管中，并且在百合花粉管中顺面和反面高尔基体附近的囊泡膜上均有分布。(本文来源于《中国农业大学》期刊2004-06-01）
细胞质力蛋白中间链论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
细胞质力蛋白在动物和低等植物细胞中不仅参与细胞内细胞器和靶分子等的运输，还参与高尔基体等细胞器的组装和定位。近来的研究表明在高等植物细胞中存在细胞质力蛋白的重链和轻链，但力蛋白中间链在高等植物细胞中还未见报道。 通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹发现，抗鸡脑细胞质力蛋白中间链单克隆抗体在百合花粉及花粉管丙酮粉中67 kDa处有免疫交叉反应。 免疫荧光标记及激光共聚焦扫描显微镜观察发现，类细胞质力蛋白中间链在百合花粉管中存在于颗粒状细胞器上；免疫荧光双标及激光共聚焦扫描显微镜观察发现，百合花粉管中类细胞质力蛋白中间链和微管存在部分共分布。对分离纯化的百合花粉及花粉管中高尔基体组分进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹发现，抗鸡脑细胞质力蛋白中间链单克隆抗体在67 kDa处有较强的免疫交叉反应；进而通过免疫金标结合电子显微镜观察发现，大多数类细胞质力蛋白中间链存在于高尔基体附近的囊泡膜上；统计结果表明，类细胞质力蛋白中间链在顺面和反面高尔基体附近囊泡膜上的分布机率大致相等。 用BFA处理百合花粉管后，通过免疫荧光标记及激光共聚焦扫描显微镜观察发现类细胞质力蛋白中间链对BFA不敏感；同样的处理发现类红膜肽对BFA敏感。 以上的结果表明类细胞质力蛋白中间链存在于百合花粉及花粉管中，并且在百合花粉管中顺面和反面高尔基体附近的囊泡膜上均有分布。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞质力蛋白中间链论文参考文献
[1].宫丽宝.细胞质动力蛋白中间链1（DYNC1I1）促进胃癌细胞增殖迁移及机制研究[D].中国医科大学.2019
[2].金卫国.百合花粉管中类细胞质力蛋白中间链的研究[D].中国农业大学.2004