论文摘要
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase associatedlipocalin,NAGL）是脂质运载蛋白（lipocallin）家族的一个新的成员,是1993年在人中性粒细胞中首先被发现的。同源分析发现,NGAL与小鼠癌基因产物24 p3同源性很高;另外研究发现,在结肠癌和乳腺癌等肿瘤组织、食管癌细胞系和卵巢癌细胞系中NGAL的表达明显增强。这提示NGAL可能是人类的一种新的癌基因。然而迄今,NGAL在肿瘤组织细胞中的过表达调控机制尚不清楚。为此本 ‘研究联合运用PCR、DNA重组、嵌套缺失以及双荧光素酶报告基因检测等技术对NGAL启动子区进行定位,同时利用生物信息学方法预测其反式作用因子,为全面阐明NGAL表达调控机制提供基本数据。内容与方法:1.提取SHEEC细胞总DNA,作为模板,利用六对引物进行PCR反应,获取NGAL5’ 侧翼区不同长度片段,-1431-+84、-1137-+84、-945-+84、-657-+84、-416-+84 和-152-+84等。将上述片段首先分别插入pGEM-Teasy,然后再亚克隆到 pGl3-Basic,构建荧光素酶报告基因检测系列质粒pB1431、pB1137、pB945、 pB657、pB416和pB152,确定NGAL启动子的大致分布区段。2.联合运用嵌套缺失和双荧光素酶报告基因检测等技术,进一步确定NGAL启动 子的较确切位置。3.运用生物信息学方法预测NGAL启动子区功能组件及其反式作用因子,探讨基 因表达调控机制。结果:1.与空载体pGL3-Basic相比,pB1431、pB1137、pB945、pB657、pB416和pB152 等的相对荧光素酶活性均明显增强（P<0.01或<0.05）,说明NGAL的启动