HBV转基因小鼠部分表型的分析及胚胎冷冻保存方法的研究

论文摘要

肝细胞癌（hepatocellar carcinoma,HCC）是世界上常见的十大恶性肿瘤之一。全世界每年约有500000～1000000个新增病例。HCC发生和发展与多种致病因素有关,尤其与乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染密切相关。流行病学研究发现约有80%的HCC与HBV的长期感染有关,持续的HBV感染者发生HCC的危险比正常人高100～200倍。HBV具有较强的种属特异性,一般不感染培养细胞,也不感染常用的实验动物（黑猩猩除外）,在一定程度上限制了对其致病机理的研究。HBV转基因小鼠的出现为研究HBV致病机制及HCC发生机制开辟了新的途径。HBV转基因小鼠的研究对探讨HBV致HCC的机制具有重要作用。 血液生化作为病理诊断的辅助性指标,对判断肝脏损伤有一定的参考价值。我们选择2、6、12、18、24月龄的P21HBsAg╱HBsAg和P21HBx/HBxHBV转基因小鼠进行血液生化指标检测,结果表明,2月龄转基因小鼠血液ALT、CHO、TG、TP值明显改变,显示转基因小鼠肝脏在早期代谢功能发生改变,小鼠肝脏可能发生损伤。 病理学研究表明,随着月龄的增加,P21HBsAg╱HBsAg、P21HBx/HBx两种转基因小鼠肝脏发生明显病变;6月龄、12月龄时肝脏出现不同程度的淋巴细胞浸润、脂肪变性、不典型增生等病理损伤,18月龄、24月龄转基因小鼠发生不同程度的肝细胞癌;24月龄转基因小鼠发生的肝肿瘤,出现转移现象;雄性小鼠的肝脏肿瘤发生率显著高于雌性小鼠。 采用OPS法,对两种转基因小鼠进行玻璃化胚胎冷冻保存方法的探索,结果野生型小鼠、P21HBsAg╱HBsAg和P21HBx╱HBx小鼠平均超排数分别为27.89、15.56、9.14枚;胚胎复率分别为88.7%、81.1%、80.3%;解冻后胚胎发育率分别为82.6%、79.4%、56.6%。结果表明HBV转基因小鼠的超排数明显低于野生型小鼠的超排数（P<0.05）,解冻后胚胎复苏率三种小鼠之间无显著性差异（P>0.05）,解冻后发育率P21HBx╱HBx小鼠明显低于野生型小鼠和P21HBsAg╱HBsAg小鼠（P<0.05）。采用胚胎移植技术,将复苏的胚胎移植到KM假孕小鼠的子宫中,成功获得5只转基因小鼠,证明采用的玻璃化胚胎冷冻方法,对HBV转基因小鼠的保种成功有效。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 实验一 HBV转基因小鼠肝脏病理学研究
• 实验二 HBV转基因小鼠血液生化指标的检测
• 实验三 HBV转基因小鼠胚胎冷冻保种保存
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 硕士期间发表文章
• 致谢