瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜免疫的影响

论文摘要

益生菌作为一种活的有机体,存在于肠道粘膜上,并对肠道黏膜有保护和调节作用,可以治疗各种肠道疾病。益生菌可直接作用于宿主的免疫系统,诱发肠道免疫,并刺激胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官的发育,促进巨噬细胞活力或发挥佐剂作用,活化肠粘膜内相关淋巴组织,使SIgA分泌增加。益生菌在体液免疫和细胞免疫中发挥着调节作用,其保健作用的机理成为近年来研究的重点内容。本文选用瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticusTS206）作为研究菌株,系统地研究了其对小鼠肠道粘膜免疫的影响。本研究首先采用了改良培养基的方法,选择了瑞士乳杆菌的最适培养基;接着利用蛋白质的溶解特性和梯度离心的方法建立了菌体细胞分离纯化技术;然后采用选择性培养技术系统研究了小鼠肠道微生物区系;用放射性免疫（RIA）和酶联免疫（ELISA）检测技术系统评价了小鼠肠道粘膜中SIgA和肠道粘膜中的分泌细胞因子;同时观察条件致病菌（E.coli）灌胃组对小鼠粘膜免疫的影响,研究瑞士乳杆菌对小鼠肠粘膜免疫系统的作用方式。实验结果表明:①瑞士乳杆菌的最适培养基为溴甲酚绿指示剂培养基。②瑞士乳杆菌对小鼠肠道微生物区系调节的最佳灌胃剂量为2×107cfu/d。③长期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜中SIgA含量的影响:瑞士乳杆菌灌胃组小鼠肠道粘膜中SIgA的含量在第10天达到最大值,和对照组相比差异极显著（P＜0.01）,肠道粘膜中SIgA含量显著升高。短期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜中SIgA含量的影响:瑞士乳杆菌灌胃组小鼠肠道粘膜中SIgA含量在24h内持续上升。④长期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道中细胞因子的影响:瑞士乳杆菌灌胃组小鼠肠道中四种细胞因子和比对照组明显升高（P＜0.05）,瑞士乳杆菌灌胃组小鼠肠道内Th1型细胞因子（IL-2,IFN-γ）在第3d前达到最大值;Th2型细胞因子（IL-4,IL-6）在第5d达到顶峰;Th1型和Th2型T细胞因子的比例和对照组相比无显著性差异（P＞0.05）,肠道免疫功能未出现异常;大肠杆菌灌胃组则出现了异常。大肠杆菌灌胃组则出现异常。短期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道中细胞因子的影响:IL-2和IL-6在第6h达到最高点;IL-4在第1h达到最高点;IFN-γ在第3h达到最高值;Th2型细胞因子比Th1型的多,于是可以推测出Th1型T细胞可能是比Th2型的少一些,这是由于T细胞短时间内不同分化方向造成的。和长期灌胃组相比短期灌胃组细胞因子的波动比较大,而长期灌胃组的结果更能反映瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜免疫的调理作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 课题研究背景
• 1.1.1 益生菌研究的相关背景
• 1.1.2 肠道粘膜免疫系统研究的相关背景
• 1.1.3 肠道微生物群系与人类健康的关系
• 1.1.4 益生菌对小鼠肠道粘膜免疫影响的相关研究
• 1.1.5 益生菌和肠道粘膜免疫
• 1.1.6 瑞士乳杆菌的国内外研究现状
• 1.2 课题研究的依据
• 1.2.1 肠道粘膜免疫的研究依据
• 1.2.2 益生菌和肠道免疫应答
• 1.2.3 肠道微生物区系一些常用的检测方法
• 1.2.4 免疫球蛋白及细胞因子的一些常用的检测方法
• 1.2.5 利用乳清粉溶液发酵瑞士乳杆菌TS206的依据
• 1.3 课题研究的意义
• 1.4 课题主要研究的内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 原料
• 2.1.2 主要化学试剂
• 2.1.3 实验菌种
• 2.1.4 培养基
• 2.1.5 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 瑞士乳杆菌最适培养基的选择
• 2.2.2 瑞士乳杆菌菌体细胞的分离技术与菌悬液的制备
• 2.2.3 大肠杆菌菌浓-OD值标准曲线的绘制和菌悬液的配制
• 2.2.4 实验小鼠分组以及灌胃剂量与方式
• 2.2.5 小鼠肠道微生物区系以及肠粘膜免疫相关功能成分的测定方法
• 第三章 结果与分析
• 3.1 瑞士乳杆菌最适培养基的确定
• 3.2 瑞士乳杆菌菌体细胞的分离技术
• 3.2.1 瑞士乳杆菌菌浓-OD值标准曲线
• 3.2.2 大肠杆菌菌浓-OD值标准曲线
• 3.3 瑞士乳杆菌对小鼠肠道微生物区系的影响
• 3.3.1 小鼠肠道中微生物菌落的形态观察结果
• 3.3.2 瑞士乳杆菌对小鼠肠道内乳酸菌类的影响
• 3.3.3 瑞士乳杆菌对小鼠肠道内双歧杆菌类的影响
• 3.3.4 瑞士乳杆菌对小鼠肠道内肠杆菌类的影响
• 3.3.5 瑞士乳杆菌对小鼠肠道内肠球菌类的影响
• 3.3.6 瑞士乳杆菌对小鼠肠道中致病性大肠杆菌的影响
• 3.4 长期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜中SIgA的影响
• 3.5 长期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道中细胞因子的影响
• 3.5.1 瑞士乳杆菌对小鼠肠道中IL-2的影响
• 3.5.2 瑞士乳杆菌对小鼠肠道中IL-4的影响
• 3.5.3 瑞士乳杆菌对小鼠肠道中IL-6的影响
• 3.5.4 瑞士乳杆菌对小鼠肠道中IFN-γ的影响
• 3.5.5 瑞士乳杆菌对小鼠肠道中IFN-γ/IL-4的影响
• 3.6 短期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜中SIgA及肠道中细胞因子的影响
• 3.6.1 短期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜中SIgA含量的影响
• 3.6.2 短期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道中细胞因子的影响
• 第四章 结论
• 4.1 研究结果
• 4.1.1 瑞士乳杆菌最适培养基的选择
• 4.1.2 瑞士乳杆菌菌体细胞的分离技术
• 4.1.3 瑞士乳杆菌对小鼠肠道微生物区系的影响
• 4.1.4 长期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜中SIgA的影响
• 4.1.5 长期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道中细胞因子的影响
• 4.1.6 短期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道粘膜中SIgA的影响
• 4.1.7 短期灌胃瑞士乳杆菌对小鼠肠道中细胞因子的影响
• 4.2 研究取得的创新点
• 4.3 实验中还需进一步解决的问题
• 4.4 研究展望
• 参考文献
• 论文、参加科研情况说明
• 致谢