子痫前期患者胎盘组织中晚期糖基化终产物受体、P-选择素的基因表达及意义

论文摘要

背景与目的子痫前期（preeclampsia PE）为妊娠期高血压疾病中的一种,是妊娠期特有疾病,是导致孕产妇及围生儿死亡的一个重要原因,因而多年来一直是国内外学者研究的热点课题。子痫前期的病因和发病机制及其复杂,且至今尚无统一的观点。近年来炎症反应在子痫前期发病机制中的作用逐渐受到重视,体内外各种影响因素导致胎盘氧化应激,释放大量胎盘炎性因子,从而导致炎症反应和血管内皮细胞受损的发生,此机制受到目前国内外许多学者的认可。P-选择素（P-selectin）被称为参与炎症反应的典型黏附分子代表,是启动炎症反应和维持炎性状态的一个关键因素。它是细胞黏附分子（cell adhesion molecules cAMs）中选择素家族的主要成员,通常储存在内皮细胞的分泌颗粒、静止的血小板颗粒及致密颗粒中,当其受到组胺、凝血酶、缺氧及氧化应激等刺激时,表达量可迅速增高,参与炎症反应的发生。研究发现,妊娠期间P-selectin在母胎界面的细胞内表达,当其在体内的表达明显增加时,可激活血小板,释放大量血小板活化因子（PAF）,增强炎症反应,激活多核巨细胞（RMN）,进而破坏内皮细胞的结构和完整性,导致微血管堵塞及血管收缩功能障碍,胎盘供血量明显减少,胎儿的生长发育受到限制。这可能是子痫前期发生、发展的主要病理机制之一。晚期糖基化终产物受体（recepor of advanced glycation end products RAGE）是免疫球蛋白超家族的成员,是典型的单跨膜片段受体。人RAGE基因位于6号染色体上（6p21.3）,有近400个氨基酸残基组成。RAGE功能复杂,可与多种配体结合,通过细胞P21Ras、分裂原激活蛋白激酶（MAPK）、cdc42/rac、JAK （Janus激酶）/STAT（信号转导子和转录激活子）、核转录因子-κB （nuclear factor-κB NF-κB）等多种传导通路激活细胞内部各种信号转导机制,诱导细胞结构和功能紊乱,参与多种疾病的发生。Cooke等报道,正常孕妇胎盘、子宫肌层内均有RAGE的表达,并且子痫前期患者的RAGE表达明显高于正常孕妇。另外,RAGE的配体在子痫前期患者血清及胎盘中的表达也明显升高,提示RAGE可能参与了在子痫前期的病理过程。本文运用免疫组化SP法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定正常孕妇和子痫前期患者胎盘组织中RAGE、P-selectin表达水平的变化,研究两因子在正常孕妇和子痫前期患者胎盘组织中的分布和表达情况,从而探讨两因子与子痫前期发病及病情程度的相关性。材料与方法1临床病历资料选择2009年5月至2009年12月在郑州大学第一附属医院妇产科住院的子痫前期患者40例（轻度患者20例,重度患者20例）作为实验组,平均年龄29.5±4.8岁,平均孕周36.5±2.4周,孕次2.3±0.4次：取同期30例正常孕妇为对照组,平均27.2±2.4岁,平均孕周38.5±4.6周,孕次2.1±0.6次。正常孕妇与轻、重度子痫前期患者年龄、身高、体重等一般资料经检验无统计学差异（p=0.10）。所选对象均无近期感染,无高血压、糖尿病、肾病、反复流产史及免疫性疾病等病史,无其他妊娠合并症及并发症。诊断标准参照《妇产科学》第7版。分娩方式均为剖宫产,阴道分娩者未入选。2实验方法运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR法）从基因水平分别检测正常孕妇和子痫前期患者胎盘组织中RAGE和P-selectin mRNA的表达,应用免疫组织化学法（SP法）从蛋白水平水平分别检测正常孕妇和子痫前期患者胎盘组织中RAGE和P-selectin蛋白的表达。3统计学分析本数据采用SPSS16.0系统软件进行统计学处理,各组胎盘组织中RAGE,P-selectin mRNA和蛋白的表达采用方差分析,组间比较采用LSD-t检验,相关性分析用Spearman相关,检验水准a=0.05。结果1免疫组化染色结果发现RAGE在各组胎盘滋养细胞中均有阳性表达,血管内皮细胞中也有少量表达,P-selectin主要表达于合体滋养细胞、血管内皮细胞及间质细胞。实验组胎盘组织中RAGE、P-selectin的平均灰度值分别为：轻度子痫前期组121.10±13.01、125.86±9.13,重度子痫前期组152.06±12.31、161.09±11.37,对照组胎盘组织中RAGE、P-selectin的平均灰度值分别为101.08±6.72、106.54±9.53；实验组明显高于对照组,且重度子痫前期组高于轻度子痫前期组（FRAGE=250.125, Fp-selecting=274.044, P<0.01）。2 RT-PCR结果为实验组RAGE、P-selectin mRNA的相对表达量分别为：轻度子痫前期组0.455±0.059、0.417±0.052,重度子痫前期组0.863±0.097、0.763±0.049,对照组二者mRNA的相对表达量分别为：0.234±0.019、0.318±±0.026；实验组高于对照组且重度子痫前期组高于轻度子痫前期组（FRAGE=624.55, FP-selecting=708.35,P<0.05）,与组织化学分析结果一致。3经相关性分析显示：子痫前期患者胎盘中RAGE蛋白的表达与P-selectin的蛋白的表达成正相关（r轻度=0.513,r重度=0.796,P<0.05）；且RAGE与P-selectin mRNA的表达成正相关（r轻度=0.607,r重度=0.814,P<0.05）。结论1 RAGE蛋白及RAGE mRNA在子痫前期患者胎盘组织中的表达高于正常孕妇组,提示其高表达在子痫前期的发生、发展中具有一定作用。2 P-selectin蛋白及P-selectin mRNA在子痫前期患者胎盘组织中的表达高于正常孕妇组,提示其高表达与子痫前期的发生、发展关系密切。3 RAGE、P-selectin在子痫前期的患者胎盘组织中的表达成正相关,提示二者可能在子痫前期发生、发展过程中具有协同作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述 RAGE、P-SELECTIN及相关炎性因子与子痫前期的关系
• 小结
• 参考文献
• 个人简历
• 在校期间发表的学术论文与研究成果
• 致谢