早期正常妊娠和自然流产蜕膜组织STAT1基因表达及其功能研究

论文摘要

目的:对自然流产蜕膜组织基因表达谱（采用基因芯片技术）的分析发现,信号转导及转录激活因子1（signal transducers and activators of transcription,STAT1）基因为显著上调表达基因之一。STAT1作为JAK/STAT1信号转导途径的中心环节,在调节相应基因的转录和表达过程中发挥了重要作用。现有大量研究表明许多细胞因子（IFN、IL-2、IL-4、IL-6、CNTF等）和生长因子（EGF、PDGF、CSF等）都利用该信号转导途径诱导细胞的增殖、分化或凋亡。目前尚未见STAT1在早孕蜕膜组织的研究。本文在前期对自然流产蜕膜组织基因表达谱研究的基础上,首次从基因水平和蛋白水平对STAT1在正常妊娠和自然流产蜕膜组织中的表达规律进行了分析,以探讨STAT1在胚胎植入和自然流产发生过程中的作用。方法:1.正常妊娠蜕膜组1)分别收集第6～11周正常妊娠人工流产蜕膜组织。2)-80℃冻存组织,分别提取各蜕膜组织总RNA,半定量RT-PCR检测蜕膜组织中STAT1 mRNA的表达。3)运用原位杂交方法定位并检测STAT1 mRNA的表达。4)采用免疫组织化学技术直接观察,以及免疫荧光化学技术半定量检测蜕膜组织中STAT1的表达规律。5)-80℃冻存组织,分别提取各蜕膜组织总蛋白,Western Blot进一步鉴定STAT1在蜕膜组织中的表达。2.自然流产蜕膜组1)分别收集第6～11周自然流产的蜕膜组织,包括稽留流产蜕膜组织、难免流产蜕膜组织、先兆流产蜕膜组织。2)方法同正常妊娠蜕膜组2)～5)。结果:1.正常妊娠蜕膜组1)RT-PCR检测STAT1 mRNA的表达,随孕周的增加呈递减趋势。2)原位杂交定位检测STAT1 mRNA的表达,其分布于蜕膜基质细胞胞浆,第6周染色最深、阳性面积最大,随孕周的增加呈递减趋势,第11周最弱。3)Western Blot鉴定与RT-PCR结果基本一致,随孕周的增加STAT1蛋白表达呈递减趋势。4)免疫组织化学和免疫荧光化学结果显示,STAT1在各孕周蜕膜基质细胞胞浆中均有表达,第6周染色最深、阳性细胞数最多,随孕周的增加呈递减趋势,第11周最弱。2.自然流产蜕膜组1)RT-PCR检测,三类自然流产标本（稽留流产蜕膜组织、难免流产蜕膜组织、先兆流产蜕膜组织）STAT1 mRNA的表达无差异,但表达强度显著高于正常蜕膜组织。2)原位杂交定位检测STAT1 mRNA的表达,其广泛分布于蜕膜基质细胞浆和细胞核,三类自然流产蜕膜组织之间表达无显著差异,但表达强度显著高于正常蜕膜组织。3)Western Blot分析,三类自然流产蜕膜组织STAT1蛋白表达量无显著差异,但均显著高于正常妊娠蜕膜组。4)免疫组织化学和免疫荧光化学结果显示,三类自然流产蜕膜组织表达无显著差异,阳性结果广泛分布于蜕膜基质细胞浆和细胞核,染色均显著深于正常蜕膜组织。结论:运用半定量RT-PCR、免疫组织化学、原位杂交、Western Blot、免疫荧光化学技术对自然流产蜕膜组织和正常妊娠蜕膜组织中STAT1进行定性定量检测,结果表明STAT1在正常妊娠第6～11周蜕膜组织表达呈现逐渐降低趋势,在自然流产蜕膜组织表达显著高于正常妊娠蜕膜组织,表明STAT1在胚胎正常植入过程中发挥了一定作用,表达异常增高时可通过某些机制影响胚胎正常植入,从而导致流产。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分：正常妊娠早期蜕膜STAT1 的表达规律及功能研究
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 第二部分：STAT1 在早期自然流产发生中的作用
• 1. 材料
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间撰写的论文