论文摘要
第一部分中脑黑质器官型脑片培养建立帕金森病模型目的:建立体外乳鼠器官型中脑黑质脑片培养模型,为研究帕金森病建立实验平台。方法:取10天龄Wistar乳鼠中脑黑质脑片进行培养,加入低剂量鱼藤酮,在倒置显微镜下直接观察黑质脑片的变化情况,测定脑片培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量利用免疫组化染色技术观察黑质中酪氨酸羟化酶（TH）阳性的多巴胺神经元损伤情况。结果:倒置显微镜下观察脑片培养20余天内能基本正常生长,大约20余天后脑片活性下降并逐渐死亡;LDH检测结果显示脑片稳定培养5-7天后LDH释放水平降低;TH免疫组织化学染色显示脑片结构清晰,黑质多巴胺神经元显示清晰,加入低剂量鱼藤酮后的实验组较对照组多巴胺神经元数量较对照组明显减少。结论:20余天内脑片基本生长良好,低剂量鱼藤酮可以在黑质脑片培养体系中选择性地导致多巴胺能神经元凋亡,成功在乳鼠器官型中脑黑质脑片上建立了帕金森病模型。第二部分鱼藤酮致乳鼠黑质脑片多巴胺神经元损伤的实验研究目的:探讨低剂量鱼藤酮对乳鼠中脑黑质脑片多巴胺能神经元的毒性作用及依达拉奉的保护作用。方法:取Wistar乳鼠中脑黑质脑片进行培养,试验组加入不同剂量鱼藤酮,对照组中加入自由基清除剂依达拉奉;在倒置显微镜下直接观察脑片黑质部位的变化情况;测定脑片培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量;测定培养液中GSH-Px、SOD、MDA的含量;免疫组化染色技术观察黑质中酪氨酸羟化酶（TH）阳性的多巴胺神经元损伤情况;western-blot测定脑片中α-突触核蛋白（α-Synuclein）的含量;电镜观察脑片超微病理结构。结果:脑片经免疫组化染色发现鱼藤酮可以以时间及剂量依赖的方式导致黑质TH阳性神经元的凋亡,α-synuclein表达增高（P<0.05）,使用自由基清除剂依达拉奉后与对照组相比, DA神经元凋亡和α-synuclein的生成均有减少。结论:成功利用中脑脑片器官型培养体系建立了帕金森病模型;低剂量鱼藤酮导致多巴胺神经元的凋亡,并导致α-synuclein的含量增加,自由基清除剂依达拉奉对此有保护作用。
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