论文摘要
目的：观察三肽化合物酪丝亮肽（YSL）的抗肿瘤作用，初步探讨其影响肝癌细胞线粒体功能，诱导细胞凋亡的可能机制。方法：1．应用MTT法观察YSL体外对人肝癌BEL-7402细胞和人正常肝细胞L-02的细胞增殖的影响。2．应用流式细胞术分析YSL体外对人肝癌细胞BEL-7402和人正常肝细胞L-02细胞诱导凋亡作用，应用透射电镜观察YSL对肝癌细胞超微结构的影响。3．应用酶化学法观察YSL体外对人肝癌BEL-7402细胞和人正常肝细胞L-02的线粒体呼吸链复合体Ⅳ酶活性的影响。4．应用流式细胞术观察YSL体外对人肝癌细胞BEL-7402和人正常肝细胞L-02细胞线粒体膜电位的影响。5．Western Blot方法分析YSL体外对人肝癌细胞BEL-7402和人正常肝细胞L-02内促凋亡物质活性caspase-3蛋白含量的影响。结果：1．YSL在体外给药剂量为0.01-100μg／ml时，能够抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖，以1μg／ml和10μg／ml的作用效果最佳，作用48hrs后抑制率分别为27.75％、28.47％。YSL对人正常肝细胞L-02的体外增殖无明显影响。2．YSL对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402有较明显的促凋亡和死亡作用，YSL浓度为1μg／ml、10μg／ml作用48hrs后其早期凋亡率分别为19.95％和20.18％，死亡率分别为47.42％和40.51％，明显高于对照组（P＜0.05）。YSL对人正常肝细胞L-02的凋亡和死亡未见明显影响。超微结构研究显示YSL体外可引起BEL-7402细胞凋亡和死亡，胞浆明显肿胀、水肿，线粒体和粗面内质网崩解，扩张的内质网中有散在的钙颗粒。3．YSL可以显著降低人肝癌BEL-7402细胞线粒体酶复合体Ⅳ的活性，作用48hrs后，YSL（1μg／ml、10μg／ml）组复合体Ⅳ酶活性分别为3.82μmol／min／mg pro和3.58μmol／min／mg pro，与对照组相比明显降低（P＜0.05）。而YSL对人正常肝细胞L-02细胞线粒体复合体Ⅳ酶活性没有明显影响（P＞0.05）。4．YSL（1μg／ml、10μg／ml）可以显著降低人肝癌细胞BEL-7402细胞线粒体膜电位，药物作用0.5hr时，线粒体膜电位没有明显变化，作用1hr后线粒体膜电位开始下降。在48hrs的观测时期内，各观测时间点测得的表示线粒体膜电位的荧光强度值均明显低于对照（P＜0.05）。YSL体外对人正常肝细胞L-02线粒体膜电位未见明显影响。5．YSL（1μg／ml、10μg／ml）作用48hrs后，能明显增加体外培养人肝癌BEL-7402细胞中促凋亡物质活性caspase-3的蛋白含量，而对正常肝细胞L-02中的活性caspase-3则未见明显影响。结论：酪丝亮肽能特异性抑制人肝癌BEL-7402细胞线粒体呼吸链复合体Ⅳ的酶活性，降低细胞线粒体膜电位，损伤肿瘤细胞线粒体，增加细胞内促凋亡物质活性caspase-3的产生，诱导BEL-7402细胞凋亡。对正常肝细胞L-02的上述指标则没有明显影响。
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