本文主要研究内容
作者李瑞林（2019）在《家蚕贮存蛋白基因Bm30K-19G1和BmSP1在抵御球孢白僵菌感染过程中的作用》一文中研究指出：家蚕(Bombyx mori)不仅是一种重要的经济昆虫,也是一种重要的模式昆虫,在昆虫的生理、发育、遗传和免疫调控等科学研究领域发挥着重要作用。在蚕业生产中,病原微生物的入侵常常给养蚕业带来极大的损失;其中,球孢白僵菌(Beauveria bassiana)因其致病力强、易传染、宿主范围广等特点成为对蚕业生产危害最严重的一种病原真菌。本研究小组前期通过数字基因表达谱技术筛选了家蚕在感染球孢白僵菌后的差异表达基因,发现家蚕感染球孢白僵菌后家蚕贮存蛋白(storage protein,SP)基因的表达水平显著上调。因此推断贮存蛋白在家蚕应对球孢白僵菌侵染的过程中发挥着重要的生理生化作用及一定的抗真菌作用。本研究成功表达了家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1,分别研究贮存蛋白在家蚕体内体外对球孢白僵菌孢子以及菌丝的抑制作用;并且通过杆状病毒表达系统表达了家蚕贮存蛋白BmSP1,研究其对球孢白僵菌的抑菌作用和在家蚕血淋巴中的抗黑化反应,并且进一步筛选获得了BmSP1的互作蛋白。得到的主要结果如下:1.家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1对球孢白僵菌具有一定的抗真菌作用家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1是一种低分子量载脂蛋白,在第五龄幼虫的血淋巴中含量丰富。在本研究中,通过PCR扩增获得Bm30K-19G1的ORF序列,该序列长为1311bp,编码436个氨基酸的肽段。实时荧光定量PCR表明,Bm30K-19G1在5龄幼虫的所有组织中均有表达,在脂肪体中表达量最高,在中肠中表达量最低。以pET-28a(+)为载体并以E.coli Arctic Express(DE3)为表达菌株,在原核表达系统中成功表达了Bm30K-19G1蛋白。重组Bm30K-19G1蛋白对球孢白僵菌分生孢子的萌发和菌丝生长具有抑制作用,在家蚕体内也能抑制白僵菌的生长和繁殖,并将被感染家蚕幼虫的半数致死时间推迟6.4小时,将全部死亡时间推迟了10小时。这些结果表明家蚕贮存蛋白Bm30K-19G1不仅是一种贮存蛋白还是一种抗真菌蛋白,对白僵菌的生长繁殖具有一定的抑制作用。2.家蚕贮存蛋白BmSP1的表达分析及其互作蛋白筛选通过qRT-PCR检测了BmSP1在家蚕体内的表达谱,结果表明BmSP1在家蚕体内随着家蚕龄期的增加其表达量也不断增加,并且在家蚕脂肪体中的表达量最高。采用家蚕杆状病毒表达系统,成功表达了BmSP1融合蛋白,但抑菌圈实验没有检测到BmSP1融合蛋白对球孢白僵菌的抑菌作用,而在家蚕幼虫体内过表达重组蛋白BmSP1表现出较强的抑制血淋巴黑化的能力。为进一步研究BmSP1基因在球孢白僵菌感染蚕中上调表达的作用,采用免疫共沉淀技术以EGFP作为抗原决定簇筛选与BmSP1相互作用的蛋白质,发现低分子30 kDa载脂蛋白PBMHP-6前体(BmLP6)为BmSP1的互作蛋白,酵母双杂交实验证实了BmSP1与BmLP6之间的相互作用。因此推测,虽然BmSP1对球孢白僵菌没有直接的抑菌作用,但与BmLP6可能在家蚕发育和先天免疫调节网络中具有一定的相互作用。研究结果有助于进一步阐释BmSP1的功能以及家蚕先天免疫的调控网络。
Abstract
jia can (Bombyx mori)bu jin shi yi chong chong yao de jing ji kun chong ,ye shi yi chong chong yao de mo shi kun chong ,zai kun chong de sheng li 、fa yo 、wei chuan he mian yi diao kong deng ke xue yan jiu ling yu fa hui zhao chong yao zuo yong 。zai can ye sheng chan zhong ,bing yuan wei sheng wu de ru qin chang chang gei yang can ye dai lai ji da de sun shi ;ji zhong ,qiu bao bai jiang jun (Beauveria bassiana)yin ji zhi bing li jiang 、yi chuan ran 、su zhu fan wei an deng te dian cheng wei dui can ye sheng chan wei hai zui yan chong de yi chong bing yuan zhen jun 。ben yan jiu xiao zu qian ji tong guo shu zi ji yin biao da pu ji shu shai shua le jia can zai gan ran qiu bao bai jiang jun hou de cha yi biao da ji yin ,fa xian jia can gan ran qiu bao bai jiang jun hou jia can zhu cun dan bai (storage protein,SP)ji yin de biao da shui ping xian zhe shang diao 。yin ci tui duan zhu cun dan bai zai jia can ying dui qiu bao bai jiang jun qin ran de guo cheng zhong fa hui zhao chong yao de sheng li sheng hua zuo yong ji yi ding de kang zhen jun zuo yong 。ben yan jiu cheng gong biao da le jia can zhu cun dan bai Bm30K-19G1,fen bie yan jiu zhu cun dan bai zai jia can ti nei ti wai dui qiu bao bai jiang jun bao zi yi ji jun si de yi zhi zuo yong ;bing ju tong guo gan zhuang bing du biao da ji tong biao da le jia can zhu cun dan bai BmSP1,yan jiu ji dui qiu bao bai jiang jun de yi jun zuo yong he zai jia can xie lin ba zhong de kang hei hua fan ying ,bing ju jin yi bu shai shua huo de le BmSP1de hu zuo dan bai 。de dao de zhu yao jie guo ru xia :1.jia can zhu cun dan bai Bm30K-19G1dui qiu bao bai jiang jun ju you yi ding de kang zhen jun zuo yong jia can zhu cun dan bai Bm30K-19G1shi yi chong di fen zi liang zai zhi dan bai ,zai di wu ling you chong de xie lin ba zhong han liang feng fu 。zai ben yan jiu zhong ,tong guo PCRkuo zeng huo de Bm30K-19G1de ORFxu lie ,gai xu lie chang wei 1311bp,bian ma 436ge an ji suan de tai duan 。shi shi ying guang ding liang PCRbiao ming ,Bm30K-19G1zai 5ling you chong de suo you zu zhi zhong jun you biao da ,zai zhi fang ti zhong biao da liang zui gao ,zai zhong chang zhong biao da liang zui di 。yi pET-28a(+)wei zai ti bing yi E.coli Arctic Express(DE3)wei biao da jun zhu ,zai yuan he biao da ji tong zhong cheng gong biao da le Bm30K-19G1dan bai 。chong zu Bm30K-19G1dan bai dui qiu bao bai jiang jun fen sheng bao zi de meng fa he jun si sheng chang ju you yi zhi zuo yong ,zai jia can ti nei ye neng yi zhi bai jiang jun de sheng chang he fan shi ,bing jiang bei gan ran jia can you chong de ban shu zhi si shi jian tui chi 6.4xiao shi ,jiang quan bu si wang shi jian tui chi le 10xiao shi 。zhe xie jie guo biao ming jia can zhu cun dan bai Bm30K-19G1bu jin shi yi chong zhu cun dan bai hai shi yi chong kang zhen jun dan bai ,dui bai jiang jun de sheng chang fan shi ju you yi ding de yi zhi zuo yong 。2.jia can zhu cun dan bai BmSP1de biao da fen xi ji ji hu zuo dan bai shai shua tong guo qRT-PCRjian ce le BmSP1zai jia can ti nei de biao da pu ,jie guo biao ming BmSP1zai jia can ti nei sui zhao jia can ling ji de zeng jia ji biao da liang ye bu duan zeng jia ,bing ju zai jia can zhi fang ti zhong de biao da liang zui gao 。cai yong jia can gan zhuang bing du biao da ji tong ,cheng gong biao da le BmSP1rong ge dan bai ,dan yi jun juan shi yan mei you jian ce dao BmSP1rong ge dan bai dui qiu bao bai jiang jun de yi jun zuo yong ,er zai jia can you chong ti nei guo biao da chong zu dan bai BmSP1biao xian chu jiao jiang de yi zhi xie lin ba hei hua de neng li 。wei jin yi bu yan jiu BmSP1ji yin zai qiu bao bai jiang jun gan ran can zhong shang diao biao da de zuo yong ,cai yong mian yi gong chen dian ji shu yi EGFPzuo wei kang yuan jue ding cu shai shua yu BmSP1xiang hu zuo yong de dan bai zhi ,fa xian di fen zi 30 kDazai zhi dan bai PBMHP-6qian ti (BmLP6)wei BmSP1de hu zuo dan bai ,jiao mu shuang za jiao shi yan zheng shi le BmSP1yu BmLP6zhi jian de xiang hu zuo yong 。yin ci tui ce ,sui ran BmSP1dui qiu bao bai jiang jun mei you zhi jie de yi jun zuo yong ,dan yu BmLP6ke neng zai jia can fa yo he xian tian mian yi diao jie wang lao zhong ju you yi ding de xiang hu zuo yong 。yan jiu jie guo you zhu yu jin yi bu chan shi BmSP1de gong neng yi ji jia can xian tian mian yi de diao kong wang lao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自江苏科技大学的李瑞林，发表于刊物江苏科技大学2019-07-10论文，是一篇关于家蚕论文,贮存蛋白论文,抗真菌论文,抗黑化反应论文,江苏科技大学2019-07-10论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自江苏科技大学2019-07-10论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：家蚕论文; 贮存蛋白论文; 抗真菌论文; 抗黑化反应论文; 江苏科技大学2019-07-10论文;