人参皂苷Rg1对Aβ诱导的星形胶质细胞核因子-κB活化及炎性反应机制的影响

论文摘要

人参皂苷Rg1是近年研究较多的一种人参单体,其主要的靶器官是中枢神经系统,现代药理学研究表明Rg1具有中枢神经兴奋、抗衰老、抗氧化、提高免疫力和增强记忆力、促进蛋白质、DNA和RNA合成等作用,是人参作用于神经系统和促智的主要有效成分之一。 AD是一种神经系统退行性疾病,其病理性标志物“老年斑”的核心组分Aβ与AD明显相关,而Aβ的周围有许多反应性星形胶质细胞,它们的激活会产生炎性蛋白,促使散在可溶的Aβ转化为丝状的、具有神经毒作用的不可溶的沉淀,故而星形胶质细胞在AD的发病过程中起着重要作用。 NF-κB是普遍存在于细胞浆中的一种快反应转录因子,它作为一组多极性基因调控蛋白,是炎症、免疫、凋亡等过程的中心调节环节。现代研究表明NF-κB在神经系统中具有“双刃剑”的作用:它的适度激活能对神经元起保护作用,然而在胶质细胞中的过度活化,却能导致胶质细胞释放炎症因子、增加载脂蛋白E（apoE）的表达、产生氧化应激反应,以致产生细胞凋亡,从而加速AD的发生、发展及其恶化。 研究目的:本课题以原代培养的星形胶质细胞为靶标,研究在Aβ25-35诱导下是否通过激活其NF-κB的表达,降低细胞活力;人参皂苷Rg1保护星形胶质细胞的作用是否与阻断NF-κB的激活及其继发的炎症反应存在联系及其相关的作用机制。 方法:建立原代星形胶质细胞培养方法,用倒置显微镜进行形态学观察,用免疫细胞化学的方法鉴定星形胶质细胞的纯度,结合MTT检测细胞活力的方法,进行Aβ造模浓度和时间的选择以及人参皂苷Rg1预处理最佳浓度的选择;用激光共聚焦显微镜和Leica Confocal图像分析软件检测分析FITCPI双重标记的NF-κB在细胞内的激活程度;用酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法检测IL-6的蛋白含量。数据结果以（?）±s表示,用SPSS11.0统计软件对数据进行统计分析。 结果: 1.经原代及传代培养及差速黏附的方法,获得大量几乎为单一种类细胞,其特点为胞体较大,形状不规则,多呈扁平或多角形,胞质较丰富,细胞核圆形或卵圆形,常偏于胞体一侧,细胞突起较多较长,符合星形胶质细胞形态特点,经GFAP免疫细胞化学染色,95%的细胞为阳性。 2.进行Aβ造模浓度时间的选择。显微镜下观察各组细胞,发现加入水溶性Aβ的各浓度组细胞状态均比未加Aβ的正常组差,且随浓度的提高,细胞损害有加重的趋势,用两因素方差分析对Aβ作用不同浓度和不同时点MTT的OD值进行统计,结果表明:OD值与Aβ造模浓度的关系密切（P<0.01）,造模时间对其的影响无统计学意义（P>0.05）,故只需考察Aβ浓度的变化对星形胶质细胞OD值的影响即可。各浓度组

论文目录

• 引言
• 文献综述
• 第一节 AD的炎症作用机理及研究进展
• 第二节 核因子κB与胶质细胞在阿尔茨海默病中的研究进展
• 第三节 中医对AD的认识与人参皂苷促智相关研究进展
• 研究设想
• 实验方法与结果
• 第一节 星形胶质细胞的体外培养
• 第二节 星形胶质细胞纯度鉴定
• 第三节 Aβ造模浓度时间的选择
• 第四节 人参皂苷Rg1对AD星形胶质细胞模型的活力检测
• 第五节 人参皂苷Rg1对AD星形胶质细胞模型NF-κB活性的检测
• 第六节 人参皂苷Rg1对AD星形胶质细胞模型IL-6的检测
• 讨论
• 参考文献
• 附录
• 附图
• 英文缩写表
• 在学期间发表论文及科研成果清单
• 致谢