中草药回回蒜子和金丝草抗HBV活性成分研究

论文摘要

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）引起,通过血液传播的疾病,它的传染性强,可发展成肝硬化和原发性肝细胞癌,目前尚无特效治疗药物。从中草药中寻找高效低毒的抗HBV单体化合物是发现并研制抗HBV药物的一条有效途径。本课题组前期筛选实验首次发现中草药回回蒜子和金丝草的总提取物都具有较好的抗HBV活性。回回蒜子是毛茛科毛茛属回回蒜（Rannunculus chinensis Bunge）干燥成熟的种子,多生长于山野或灌木丛中,其味苦,微寒,入肝、胆经,具有清热解毒、祛风利湿、抗癌等作用;金丝草是禾本科金丝草属植物金丝草[Pogonatherum crinitum（Thunb.）Kunth]的全草,它有清凉散热,解利尿通淋之药效,对尿路感染、肾炎、水肿、糖尿病、黄疸型肝炎、感冒高热也有疗效。为了阐明回回蒜子和金丝草的抗HBV的生物活性物质,本课题选用HepG2 2.2.15细胞为体外实验模型,以药物对HepG2 2.2.15细胞合成、分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用为评价指标,通过活性追踪,确定研究回回蒜子和金丝草抗HBV活性成分集中的正丁醇部位,它们的抗病毒作用呈明显的剂量依赖关系。本论文通过生物活性跟踪并结合化学导向的研究路线,对回回蒜子和金丝草的抗HBV活性部位进行系统分离,综合运用多种分离手段（大孔吸附树脂AB-8型柱色谱、正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、PTLC、PHPLC和重结晶等）对有效部位进行系统的分离纯化分离,从回回蒜子中分离得到15个单体化合物,通过理化测定和EI-MS、1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HMQC、1H-1H COSY等波谱手段,鉴定了其中的10个单体化合物的结构,分别为:蛇床子素（1）,2-甲氧基对苯二酚-4-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）,大黄素（3）,蒽醌（4）,1,7-二羟基-6-甲氧基-2-甲基蒽醌（5）,对羟基苯甲酸（6）,咖啡酸（7）,没食子酸（8）,熊果酸（9）,β-豆甾醇（10）,其中化合物1,2,4,5为首次从该植物中分离得到;从金丝草中分离得到17个单体化合物,通过波谱手段鉴定了其中的13个单体化合物的结构,分别为:咖啡酸（7）,β-豆甾醇（10）,化合物11（对羟基苯甲酸,间羟基苯甲酸）,间羟基苯甲醇（12）,β-谷甾醇（13）,β-胡萝卜苷（14）,苜蓿素（15）,木犀草素（16）,芹菜素（17）,木犀草素-6-C-β-波依文糖苷（18）,木犀草素-6-C-β-葡萄糖苷（19）,芹菜素-6-C-β-波依文糖-7-O-β-葡萄糖苷（20）,木犀草素-6-C-β-波依文糖-7-O-β-葡萄糖苷（21）,其中化合物7,11,12,14为首次从该植物中分离得到。本论文选用HBV-DNA转染人肝癌细胞所得的HepG2 2.2.15细胞为体外实验模型,以药物对HepG2 2.2.15细胞合成、分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用为评价指标,对活性部位分离得到的单体化合物进行初步抗HBV活性筛选评价,发现4个化合物具有不同程度的抗HBV作用,分别为从回回蒜子中分离得到的化合物2（2-甲氧基对苯二酚-4-β-D-吡喃葡萄糖苷）,其对HBsAg合成分泌的IC50值为69.66μg/ml;从金丝草中分离得到的化合物18（木犀草素-6-C-β-波依文糖苷）、19（木犀草素-6-C-β-葡萄糖苷）、21（木犀草素-6-C-β-波依文糖-7-O-β-葡萄糖苷）,其中化合物18对HBsAg和HBeAg合成分泌的IC50值为4.74、16.55μg/ml,化合物19对HBsAg和HBeAg合成分泌的IC50值为12.38、22.61μg/ml,化合物21对HBsAg合成分泌的IC50值为33.47μg/ml。其中化合物18具有显著的抗HBV活性。初步研究结果表明:黄酮苷类化合物可能为金丝草抗HBV活性的主要物质基础之一;木犀草素苷元可能是黄酮类化合物抗HBV的一类活性必须基团;黄酮类化合物的糖基个数和种类可能影响其抗HBV活性,波依文糖单糖取代的黄酮类碳苷化合物活性明显强于其他糖取代的黄酮苷类化合物。黄酮苷类化合物在金丝草药材中含量丰富,具有进一步研究开发的潜力,有望从中得到高效特异的抗HBV药物。

论文目录

• 缩略词对照表
• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 研究背景
• 1.2 研究对象、内容及方法
• 1.3 本论文研究内容
• 第二章 回回蒜子和金丝草抗HBV 活性部位化学成分研究
• 2.1 中草药抗HBV 活性部位分离鉴定的化合物(结构式、编号及中英文名称
• 2.2 化学成分的结构鉴定
• 2.3 实验部分
• 第三章 回回蒜子和金丝草抗HBV 活性单体化合物
• 3.1 实验仪器与材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 第四章 结果与讨论
• 4.1 课题主要研究成果
• 4.2 课题研究创新点
• 4.3 课题研究展望
• 参考文献
• 谱图
• 综述
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表论文
• 个人简历
• 致谢