那西肽发酵过程关键技术分析与优化

论文摘要

那西肽是放线菌(Streptomyces actuosus)分泌的一种多肽类抗生素,主要含有多种氨基酸与不饱和脂肪酸。其主要成分为那西肽A和那西肽B,还含有少量的那西肽C和D。那西肽对革兰氏阳性菌,特别是对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有良好的抗菌作用,通过抑制细胞壁中肽聚糖的合成来影响生物体。那西肽因为能够促进动物生长,并且能够提高饲料利用率,所以已作为词料添加剂广泛用于畜禽养殖业。本文以Streptomyces actuosus KS010菌株出发,对其发酵产那西肽进行了初步研究,主要内容包括那西肽测定方法的建立,那西肽发酵条件的优化等。对那西肽的微生物检定法和高效液相色谱法进行了优化,主要是优化了这两种方法的检测条件,确定了测定那西肽的微生物检定法的条件并作出了高效液相色谱法(HPLC)的标准曲线。主要是对浸提溶液组成、浸提时间试验比较,得出了微生物检定法的检定条件。丙酮浸提液B(丙酮:2mol/L盐酸：水=20：1：21)、浸提时间40 min。通过对流动相配比、浸提时间和流速的考察,优化了高效液相色谱法(HPLC)法的检定条件。检测波长267 nm,流动相为乙腈:35mM KH2P04 (30:70),流速为1.0mL/min。通过单因素试验,得到液态发酵产那西肽的最佳条件。种子培养基为玉米粉10 g/L,葡萄糖10 g/L,玉米浆15 g/L,蛋白胨5 g/L, (NH4)2SO45g/L, KNO32.5 g/L, NaCl 2 g/L, CaCO34 g/L, PH 7.0,培养温度28℃,发酵罐培养基的主要成分包括玉米粉2.7%、玉米浆2.1%、玉米蛋白粉1.3%以及NH4Cl0.1%、NaCl 0.5%、CaCO30.2%、酵母膏1.2%、磷酸二氢钾10.8 mmol/L、氯化锌的浓度8.4 mmol/L和葡萄糖6.3%,培养温度28℃,培养7天后效价达2158.33 U/ml。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 那西肽的理化性质
• 1.2 那西肽的生物学功能
• 1.2.1 促生长性能
• 1.2.2 抑菌性能
• 1.2.3 安全性能
• 1.3 抗菌机理及抗菌活性
• 1.3.1 抗菌机理
• 1.3.2 抗菌活性
• 1.4 那西肽的用途概述
• 1.5 那西肽的药理及临床研究
• 1.5.1 药效学研究
• 1.5.2 毒理学研究
• 1.5.3 药物残留研究
• 1.5.4 临床应用研究
• 1.6 发酵生产那西肽的研究进展
• 1.6.1 国外研究进展
• 1.6.2 国内的研究进展
• 1.7 研究内容
• 第2章 那西肽发酵工艺条件的研究
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.2.3 分析方法
• 第3章 检定方法
• 3.1 微生物检定法
• 3.1.1 浸提液的选择
• 3.1.2 浸提时间的选择
• 3.1.3 测定结果
• 3.2 HPLC法测定发酵液中的那西肽含量
• 3.2.1 检测波长的确定
• 3.2.2 流动相的确定
• 3.2.3 流速的确定
• 3.2.4 标准曲线的绘制
• 第4章 那西肽摇瓶发酵条件的优化
• 4.1 斜面冷藏时间对发酵的影响
• 4.2 种子培养基的筛选和接种种龄的确定
• 4.2.1 种子培养基的筛选
• 4.2.2 接种种龄的确定
• 4.3 发酵培养基的筛选
• 4.4 发酵培养基的优化
• 4.4.1 碳源对发酵的影响
• 4.4.2 氮源对发酵的影响
• 4.5 培养条件对发酵的影响
• 4.5.1 发酵时间的确定
• 4.5.2 接种量对发酵的影响
• 4.5.3 初始pH对发酵的影响
• 4.5.4 温度对发酵的影响
• 4.5.5 摇床转速对发酵的影响
• 4.5.6 发酵pH的变化
• 第5章 高效液相色谱检测结果
• 5.1 菌种Streptomyces actuosus KS0107b色谱图
• 5.2 菌种Streptomyces actuosus KS0106E色谱图
• 5.3 菌种Streptomyces actuosus KS0107a色谱图
• 5.4 标品溶液和样品发酵液的效价
• 结论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间所发表的论文
• 致谢
• 个人简历