肉桂醛与柠檬醛抗HL-60细胞生长效果及机理比较研究

论文摘要

众所周知，白血病属造血系统恶性肿瘤，为国内十大高发性肿瘤病之一，而且发病率呈逐年增加趋势。因此，深入开展对白血病致病机制研究开发新型、高效、低毒和价廉的药物，不仅是从事相关专业研究人员的责任，而且是关系到儿童、青少年健康和家庭幸福的大事。西药治疗血癌有化疗、放疗和血液干细胞移植三类途径，其中以化疗为主。化疗或放疗使患者带来痛苦，而输液或换血又存在诸多安全隐患。与之相比，中药对白血病保守治疗有着独特的优点，不仅资源丰富，疗效独特，而且毒副作用小、安全隐患小，同时作用途径较多，若长期服用中药还有保护和促进骨髓造血系统功能提高的作用。目前，采用纯中药医治白血病堪为上策，故为寻找抗血癌中药提供新的思路及方法已成为必然趋势。与柠檬醛抗HL-60细胞病相比，该项研究的成果不仅发现肉桂醛有较好的选择性，用量少，效果好，毒性低，而且展现出较好临床前期试验和开发情景，还发现该醛只有反式单体，有较简易的生物学制备方法及初步明确的抗HL-60细胞的作用机理，能为合成提供可行性。采用方法（1）苯甲醛和乙醛在弱酸性条件下合成反式肉桂醛。（2）用台盼蓝拒染法测定HL-60细胞的生长曲线，跟踪两种醛对HL-60细胞作用过程；（3）噻唑蓝（MTT）法检测肉桂醛和柠檬醛不同剂量和作用时间对HL-60细胞生长的影响并比较两种天然产物作用的效果；（4）应用AO/EB染色、扫描电镜形态观察法、透射电镜形态观察法来观察亚细胞形态学变化，揭示HL-60细胞受两种醛作用所发生的单细胞水平的变化规律；（5）应用流式细胞仪测试肉桂醛和柠檬醛对HL-60细胞凋亡率、线粒体膜电位的影响、细胞内ROS的产生量，阐述HL-60细胞受两种醛作用代谢所发生的变化；结果肉桂醛和柠檬醛均具有抑制HL-60细胞生长和诱导凋亡的生物学效应，而前者选择性较后者好，发现肉桂醛低浓度即可通过损伤细胞膜进入细胞使线粒体耗氧率上升；能诱发细胞凋亡，有效抑制HL-60细胞的生长；通过对ROS的测定，虽然对细胞凋亡过程与后者类似，但前者是通过使细胞呈空泡性散落，导致核是收缩性凋亡，其次药物剂量是同等凋亡但前者用量较后者少，排除了细胞的炎症发生，从而实现从单细胞及亚细胞水平实时、在位、无扰状态阐析反式肉桂醛抗HL-60细胞的作用机理，为临床应用提供了初步理论依据和技术参数。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 1 文献综述
• 1.1 白血病的概述
• 1.1.1 白血病及治疗
• 1.1.2 白血病患病机理
• 1.1.3 白血病的治疗与治愈状况
• 1.2 细胞凋亡
• 1.2.1 细胞凋亡的发现
• 1.2.2 细胞凋亡与线粒体
• 1.2.3 细胞凋亡与活性氧
• 1.2.4 细胞凋亡检测方法
• 1.2.5 细胞培养的优点
• 1.3 肉桂醛、柠檬醛和细胞凋亡
• 1.3.1 肉桂醛的提取和抗菌
• 1.3.2 柠檬醛的提取和抗菌
• 1.4 结束语
• 2 引言
• 2.1 研究意义和目的
• 2.2 课题展望
• 3 材料与方法
• 3.1 材料
• 3.1.1 材料来源
• 3.1.2 主要仪器
• 3.1.3 主要试剂和配置方法
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 生物法合成肉桂醛
• 3.2.2 细胞培养和细胞活力检测
• 3.2.3 细胞凋亡检测
• 3.2.4 SPSS 13.0 软件对实验测试数据的进行统计学处理
• 4 实验结果
• 4.1 肉桂醛的生物转化
• 4.2 HL-60 细胞生长曲线
• 4.3 MTT 法检测肉桂醛、柠檬醛不同剂量和作用时间对 HL-60 细胞生长的影响
• 4.3.1 不同时间和剂量的肉桂醛对 HL-60 细胞的作用
• 4.3.2 不同时间和剂量的柠檬醛对 HL-60 细胞的作用
• 4.4 形态学观察
• 4.4.1 倒置显微镜下细胞形态学观察
• 4.4.2 AO/EB 双荧光染色法检测细胞凋亡
• 4.4.3 扫描电镜形态观察细胞凋亡
• 4.4.4 透射电镜形态观察细胞凋亡
• 4.5 流式细胞仪 AnnexinV／PI 双染法检测细胞凋亡率
• 4.6 DCFH-DA 检测 ROS 水平
• 4.7 罗丹明 123 检测细胞线粒体膜电位变化
• 5 讨论
• 5.1 肉桂醛和柠檬醛抑制细胞生长的剂量效应的差异
• 5.2 肉桂醛和柠檬醛结构上的比较
• 5.3 细胞形态学观察比较
• 5.4 细胞膜的损伤
• 5.5 线粒体能量代谢与细胞凋亡
• 6 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 本文创新性
• 6.3 展望
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介
• 在读期间发表的学术论文及科研成果清单