论文题目: 人肝癌相关基因的检测及其功能研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 生理学
作者: 许东元
导师: 许文燮,李在琉
关键词: 肝细胞癌,肝细胞癌相关基因
文献来源: 延边大学
发表年度: 2005
论文摘要: 肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma)的发生是一个涉及到多因素、多机制、多步骤的复杂过程。有研究者认为,癌的发生是许多基因表达水平的改变导致细胞内出现一系列分子变化的结果。因而从基因水平研究肝癌的癌基因、抑癌基因的变化,寻找差异表达的基因,不仅可以在病理上寻找原因,同时可以为早期诊断和治疗以及预后提供依据。 本实验的目的在于检测EBPl(ErbB-3 binding proteinl)、PDZKlfPDZ domain containing 1)、PHLDAl(pleckstrin-homology-like domain family A,memberl)、ANXA2(annexin A2)和nm23-H2(non-metastatic cells2)等基因mRNA在肝癌组织与其相应的癌旁肝组织中的表达,筛选肝癌的相关基因,并对其进行功能学研究。 本实验提取30例肝癌组织与癌旁肝组织总RNA,利用Northern bloting技术进行癌组织与癌旁组织中EBP1、PDZK1、PHLDA1、ANXA2和nm23-H2等五种基因mRNA差异表达情况,再用Northern bloting技术检测nm23-H2基因mRNA在NIH3T3细胞、HEK293T、Chang liver和8种肝癌细胞株中的表达。利用PCR技术扩增rim23-H2基因,并通过基因重组技术构建了nm23-H2基因与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因融合表达载体pEGFPC1-nm23-H2。再采用脂质体转染法,将pEGFPC1-nm23-H2基因转入NIH3T3细胞,同时在荧光显微镜下观察GFP的表达,对转染后的NIH3T3细胞用G418(表达载体带有neo基因片断,对G418具有抗药性)筛选阳性克隆并分析克隆集落形成。在荧光显微镜下标记发光良好的单个克隆,分离克隆继续扩增培养建立稳定表达nm23-H2的细胞系,同时利用Northern bloting技术和免疫细胞化学染色方法检测NM23-H2的表达。细胞计数法测定已建立的转染oEGFPC1-nm23-H2的NIH3T3稳定细胞系、空载体细胞与阴性对照细胞生长速度,并检测c-myc表达。在激光共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)下,采用免疫荧光染色法对A293、HepG2、NIH3T3细胞进行NM23-H2编码蛋白的定位和表达。在软琼脂中培养构建的稳定细胞系观察其表型改变。在无菌条件下将3种nm23-H2基因转染NIH3T3稳定细胞系(N1,N5,
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
综述
参考文献
英文缩略语表
致谢
发布时间: 2005-11-22
参考文献
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