Prokineticin2（PK2）对神经干细胞迁移及向神经元定向分化作用的研究

论文摘要

目的:探讨Prokineticin2（PK2）在体外和局灶性脑缺血大鼠脑内对神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）迁移及分化的影响。方法:利用无血清培养和细胞克隆培养技术,从新生Wistar大鼠海马分离NSCs,进行体外扩增、培养、传代,采用免疫组织化学法做Nestin染色鉴定;将传三代的NSCs分散放置于PK2扩散源周围,PK2扩散源由5%的琼脂和PK2制成,分为1nmol PK2组、30nmol PK2组、60nmolPK组和对照组。培养于含0.3%琼脂并撤去bFGF的DMEM/F12培养液中。连续14天显微镜下观察PK2诱导NSCs迁移情况。并筛选出诱导NSCs迁移作用最佳的PK2剂量。采用线栓法把Wistar大鼠制成大脑中动脉梗塞（middle cerebral artery occlusion, MCAO）模型,按照随机数字法将MCAO模型大鼠分成3组:模型组、对照组（单纯移植NSCs）、PK2组（PK2与NSCs联合移植）,24只/组。运用立体定位仪,把经过BrdU标记的NSCs移植入MCAO模型大鼠的右侧侧脑室,将体外实验中筛选的最佳剂量PK2注入MCAO模型大鼠的右侧病灶区。各组大鼠分别于移植后1d、3d、7d、14d断头取脑,以视交叉为中心切片,用免疫组织化学方法观察BrdU阳性NSCs迁移情况,用免疫荧光方法观察迁移到病灶区NSCs的分化情况。结果:①体外研究表明,与对照组比较,不同剂量的PK2均具有诱导NSCs迁移作用,且1nmol PK2诱导迁移的作用最明显,统计学有显著性差异（p<0.01）。②在NSCs移植入MCAO模型大鼠脑内1d,在室管膜下区（sub-ventricular zone,SVZ）PK2组和对照组BrdU阳性细胞数与模型组相比明显增多,差异具有统计学意义（p<0.05）;PK2组与对照组相比BrdU阳性细胞数无明显差异（p>0.05）;在病灶区各组有散在的BrdU阳性细胞,数量没有明显差异（p>0.05）。移植后3d、7d和14d,在SVZ,PK2组BrdU阳性细胞明显多于模型组和对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;在病灶区,PK2组BrdU阳性细胞数多于模型组和对照组,且迁移到病灶区的BrdU阳性NSCs向神经元分化,差异具有统计学意义（p<0.05）。结论:PK2对体外培养的NSCs有诱导迁移作用,以1nmolPK2作用最明显;PK2对移植入MCAO模型大鼠侧脑室内的NSCs有诱导迁移的作用;PK2促进NSCs向神经元分化。

论文目录

• 一 中文摘要
• 二 英文摘要
• 三 前言
• 四 文献综述
• 五 材料与方法
• 六 结果
• 七 讨论
• 八 结论
• 九 参考文献
• 十 英文缩写